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查看更多血清標(biāo)本可按慣例辦法收集,應(yīng)留心防止溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號(hào)的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)添加非特 異性顯色。如在冰箱中保存過久,其間的可發(fā)作聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘說板式ELISA各個(gè)操作進(jìn)程的留心要點(diǎn),珠式、管式及磁性球ELSIA,國(guó)外試劑均與特別儀器合作使用,嚴(yán)厲遵循劃定操作,必能得出正確的成果。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留心不行濺出,不行產(chǎn)氣憤泡。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。
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在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置 混和,不要在混勻器上激烈振動(dòng)。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清天然凝結(jié)、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液,再在其參加血 清標(biāo)本,然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以確?;旌?。一般說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超越一周測(cè)定的需低溫冰存??捎米鱁LISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其間某種抗體 或抗原成份,ELISA試劑盒中本次實(shí)驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
ELISA試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異,海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。除特別情況外,在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。加酶結(jié)合物使用液和底 物用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程敏捷完結(jié)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)發(fā)作假陽性反應(yīng)。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以發(fā)作穿插污 染,也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑,良好的儀器和的操作是確保ELISA試劑盒檢測(cè)成果正確牢靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定(如血清 、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。
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