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我們知道ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地使用于多種病原微生物所引起的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫診斷。也已使用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)現(xiàn)已使用的成果，認(rèn)為ELISA法具有活絡(luò)、特異、簡單、快速、安穩(wěn)及易于自動(dòng)化操作等特色。
ELISA試劑盒的使用：
1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
2、研討抗酶抗體的組成。
3、閃現(xiàn)微量的免疫沉淀反響。
4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。
ELISA試劑盒的操作過程：
一、間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜;
2.次日洗刷3次;
3.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷;
4.(一起做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘，洗刷;
6.’zui終一遍用DDW洗刷。
其他過程同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
二、雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗刷，下同)。
2. 加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一起做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。
4. 加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反響：于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. 成果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調(diào)查成果：反響孔內(nèi)色彩越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反響為無色或極淺，根據(jù)所呈色彩的深淺，以“+"、“-"號(hào)表明。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)則的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
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