GelRed and Gelgreen 核酸凝膠染料

zui靈敏 , zui穩(wěn)定的核酸凝膠染色試劑，是真正的EB替代產(chǎn)品！

  GelRed and Gelgreen dye flyer          Gelred and Gelgreen 常見問題解答

圖 1. 在 1 × TBE 中分別用 GelRed 和 EB 預(yù)制 1% 瓊脂糖凝膠中 1Kb Plus DNA Ladder 稀釋物的電泳圖。從左至右各泳道 DNA 總量分別為 : 200 ng ， 100 ng ， 50 ng and 25 ng 。凝膠用 300nm 透視器顯像，用 EB 濾光片和 Polaroid 667 黑白膠片拍照。

由美國BIOTIUM公司技術(shù)專家研發(fā)的GelRed 和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過美國*安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，而不會造成任何環(huán)境污染。（下載美國Litron Laboratories, Inc. 完整安全檢測報告）

目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料（凝膠染色試劑）總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不*令人滿意。例如，雖然 EB （溴化乙啶）作為目前使用zui廣泛的核酸凝膠染色試劑，能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì)。而且EB染色后具有較高的背景熒光信號（如圖1）。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為zui靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認(rèn)為是市場上較為安全的核酸染料 ，但它的染色效果還遠(yuǎn)不及 SYBR Green I 。

至于國內(nèi)有公司宣稱的新產(chǎn)品Goldview，我們不想多加評論。因為從極為相似的對比試驗結(jié)果來看，該產(chǎn)品似乎就是AO（丫啶橙 ，一種聚毒產(chǎn)品，且熒光亮度不佳）。請看Goldview 與 AO 對比試驗結(jié)果（其中Goldview是從國內(nèi)某公司采購，AO則來自SIGMA，報告來自開放生物）

特性:

 高靈敏度
GelRed 和 GelGreen 是目前市場中zui靈敏的凝膠核酸染料
 穩(wěn)定性*
可以使用微波爐加熱，可以在室溫下保存
 更安全 
艾姆斯氏試驗結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于 溴化乙錠 （ EB ） 
 廣泛的適應(yīng)性 
適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色 
 染色過程簡單  
與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中不必?fù)?dān)心染料降解；而電泳后染色過程也只需 30 分鐘且無需脫色或沖洗  
 對 DNA 和 RNA 的遷移影響極小  
對核酸遷移的影響小于 SYBR Green I 
 與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置*兼容  
使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時， GelRed 可以*的替代 EB ；使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時， GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料（見圖 4 中的光譜圖）

Biotium公司的GelRed 和 GelGreen 無論用于預(yù)制凝膠染色還是凝膠電泳后染色，都表現(xiàn)出了*的靈敏度。為配合 312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計的 GelRed ，在使用了我們新開發(fā)的具有的試驗步驟后（該試驗步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液），在凝膠電泳后染色中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同， GelRed 在預(yù)制凝膠中使用時仍然有*的靈敏度，事實上GelRed 在檢測低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度，尤其對小分子量的 DNA 檢測非常靈敏（圖1）。 GelGreen 可以滿足使用 488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見光激發(fā)的 Dark Reader 的研究人員的使用要求。 GelGreen 無論是在預(yù)制凝膠還是凝膠電泳后染色中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng)，但不存在后者的不穩(wěn)定性問題。實際上， GelRed 和 GelGreen ，特別是 GelRed 非常穩(wěn)定，可以*在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備，*保存。

同樣重要的是， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 獨立的測試服務(wù)公司（ Litron Laboratories, Inc. ）進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測試結(jié)果表明， 在 18.5 μ g /mL （該濃度遠(yuǎn)高于*用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）濃度下， GelGreen 沒有誘變性，而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。如圖3。相反， SYBR Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線粒體和核 DNA 染色，這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入。由于已知 SYBR Green I 對紫外線導(dǎo)致的突變有強烈的增強作用（ Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91（2001） ），因此它的高細(xì)胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。

	安全性測試
	SYBR Dyes	GelRed	GelGreen
A） 5 min. incubation				要想讓DNA染色劑安全，*的辦法就是設(shè)法不讓其穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi)，Biotium 做到了！
B） 30 min incubation
圖 3. 在37°C下，分別使用1X SYBR Green I, SYBR Safe, GelRed and GelGreen 對HeLa 細(xì)胞進(jìn)行孵化，并分別在5分鐘（A）和30分鐘（B）后觀察。實驗顯示SYBR染料迅速進(jìn)入細(xì)胞并將細(xì)胞內(nèi)的核酸染成亮綠色（以上僅圖示 SYBR Green 1），而 GelRed 和 GelGreen 則因為不能穿透細(xì)胞膜而*沒有進(jìn)入細(xì)胞內(nèi), 足以證明GelRed和GelGreen是安全的。
圖 4. GelGreen （綠色） GelRed （紅色）在 PBS 緩沖溶液中結(jié)合 dsDNA 后的激發(fā)和發(fā)射光譜。
圖 5. 室溫下， GelRed TM （ 500 nm ）和 SYBR Gold （ 488 nm ）稀釋在 1 × TBE 凝膠染色液中測得的吸光度隨時間變化圖。 GelRed 和 SYBR Gold 初始的吸光度值分別為 0.029 和 0.051 。