熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)-SYBR染料法
- 公司名稱(chēng) 上海基屹生物科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/5/13 9:05:22
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real Time Quantitative PCR）
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。相對(duì)定量用于測(cè)定一個(gè)測(cè)試樣本中目標(biāo)核酸序列與校正樣本中同一序列表達(dá)的相對(duì)變化。校正樣本可以是一個(gè)未經(jīng)處理的對(duì)照或者是在一個(gè)時(shí)辰研究中處于零時(shí)的樣本。
相對(duì)定量應(yīng)用（Relative Quantification，RQ）
非特異性熒光標(biāo)記：
1、SYBR Green
SYBR Green特性：
（1）只有和雙鏈DNA結(jié)合后才發(fā)熒光。
（2）變性時(shí)，DNA雙鏈分開(kāi)，無(wú)熒光。
（3）在延伸結(jié)束階段采集熒光信號(hào)。
（4）SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)光，所以必須在反應(yīng)結(jié)束時(shí)做熔解曲線分析。
相對(duì)定量通過(guò)內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
相對(duì)定量分析方法：
2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以?xún)?nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
服務(wù)流程：
| 步驟 | 客 戶(hù) 提 供 | 服 務(wù) 內(nèi) 容 | 基 屹 提 供 |
|---|---|---|---|
| 1 | 新鮮的且盡量多的材料；已知的全長(zhǎng)基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來(lái)源、豐度等。 | DNA/RNA提取，根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。 | |
| 2 | 純化好的DNA/RNA（大于5 ug/樣品）；已知的全長(zhǎng)基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來(lái)源、豐度等。 | 根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。 | |
| 3 | 以DNA為模板，對(duì)目的基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)分析 | 提供完整的定量分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)熒光定量擴(kuò)增曲線及詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟。 |
注意：客戶(hù)可根據(jù)所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動(dòng)項(xiàng)目。
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