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【中文名稱】：CXCL10 mRNA原位雜交試劑盒

【英文名稱】：CXCL10 mRNA FISH Kit

【規(guī) 格】：100T/盒

【主要用途】：科研檢測(cè)（僅用于科研實(shí)驗(yàn)），不得用于臨床  

【保 存】：  4°C保存一年   

CXCL10 mRNA原位雜交試劑盒原理：

FISH—Cellscience設(shè)計(jì)的原位雜交，用以顯示組織和細(xì)胞中mRNA的分布。探針的3，端標(biāo)記地高辛，5’端標(biāo)記熒光素。生物素標(biāo)記的抗地高辛抗體可以與鏈霉親和素標(biāo)記的過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶結(jié)合，作用于相應(yīng)的顯色底物DAB或NBT/BCIP，顯色為棕黃色或藍(lán)紫色，探針5，端標(biāo)記的熒光素，可以在熒光顯微鏡492-549nm時(shí)發(fā)出黃綠色熒光來(lái)顯示被檢測(cè)mRNA之信號(hào)。此方法的靈敏度可基本上替代放射同位素標(biāo)記的探針且具有低背景和操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。也可以用于Northern和Southern的檢測(cè)以及原位PCR 。

原位雜交的注意事項(xiàng)：
原位雜交成套試劑盒，由于采用高效標(biāo)記的探針和敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測(cè)試劑盒；使得原位雜交實(shí)驗(yàn)的成功率大大提高，操作也更簡(jiǎn)便。但仍有一些問(wèn)題是引起注意的；
1、有條件應(yīng)盡可能用新鮮標(biāo)本，并及時(shí)進(jìn)行固定。固定液為4%多聚甲醛（0.1MPBS，PH7.0-7.6）含0.1%DEPC。因?yàn)閙RNA類基因容易降解。
2、標(biāo)本的消化對(duì)原位雜交比較重要，適當(dāng)?shù)南瘜⑹拱谢虺浞直┞?，增加探針的接觸性。但過(guò)度的消化將使標(biāo)本明顯減薄乃至消失。不同的標(biāo)本對(duì)消化的敏感性不同。常用的消化酶有蛋白酶K和胃蛋白酶。大量標(biāo)本實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)仔細(xì)摸索*的消化條件。蛋白酶K的消化條件為10ug/mL（0.1M TBS,PH7.2-7.6），37℃消化1-5分鐘。
3、雜交后的洗滌對(duì)信號(hào)/背景/強(qiáng)度有密切關(guān)系，洗滌時(shí)間越短，信號(hào)越強(qiáng)，背景也越高；洗滌時(shí)間超長(zhǎng)，信號(hào)越低。適當(dāng)?shù)南礈鞎r(shí)間會(huì)獲得理想的信號(hào)強(qiáng)度和可以忽略的背景染色。

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