ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒說明書/CA1020/北京索萊寶

生產(chǎn)商：北京索萊寶

產(chǎn)品名稱：ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒

貨號：CA1020

規(guī)格：20T/50T/100T

保存：貯存于 2-8°C，復檢期為一年。建議Annexin V-FITC打開后，分裝成小份凍存于-20°C。

ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒內(nèi)容:

Annexin V-FITC

Binding Buffer

Propidium iodide(PI)

ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒說明：

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一種分子量為35.8 KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V結(jié)合到凋亡細胞后，在藍色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細胞與正常細胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一種核酸染料，它不能穿透完整細胞膜，但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透，并使細胞核紅染。將FITC-Annexin V與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區(qū)分開來。

操作步驟: 1. 調(diào)整待測細胞的濃度為5×105-1×106個/ml。 2. 取1ml細胞，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清。 3. 加入1ml預冷的PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000rpm，4℃離心10分鐘，棄上清（對于貼壁細胞，先用胰酶消化，再用PBS洗滌）。 4. 重復步驟3兩次。 5. 將細胞重懸于200μl Binding Buffer。 6. 加入10μl Annexin V-FITC和10μl PI，輕輕混勻，避光室溫反應15分鐘 或4℃反應30 分鐘。 7. 加入300μl Binding Buffer，在1小時內(nèi)用流式細胞儀檢測。 8. 若用熒光顯微鏡檢測，將細胞混合液離心，取細胞沉淀涂片，再進行觀察。

ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒注意事項: 為保證得到理想的實驗結(jié)果在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項。 1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。 2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質(zhì)，在保存與操作時請注意避光。 3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。 4.在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留影響實驗結(jié)果。 5.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，上機前5分鐘再加入PI染色。

6.整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作。 7.反應完畢后請盡快檢測，因為細胞凋亡是一個動態(tài)的過程，反應1小時后熒光強度就開始衰變。 8.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發(fā)生凋亡時PS翻轉(zhuǎn)的比例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間等，把這些影響因素進行優(yōu)化對實驗成功是非常必要的。 此試劑盒僅供科研使用。

相關產(chǎn)品：

P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M

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科研領域ANNEXIN V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒說明書/CA1020/北京索萊寶

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