普魯士藍染色試劑盒(Perls stain)
普魯士藍染色試劑盒說明:
含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素,為金黃色或棕黃色顆粒,因其
含鐵、金黃色,故稱為含鐵血黃素。當紅細胞被巨噬細胞吞噬后,在溶酶體酶的作用下,血
紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質和含鐵的含鐵血黃素。
Perls 普魯士藍反應(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經(jīng)過亞鐵氰化
鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍色,常見于吞噬細胞內會間質內,主要顯示三價鐵鹽。Perls 普
魯士藍是非常經(jīng)典的組織化學反應,是顯示組織內三價鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法,其
染色原理為:亞鐵qing hua jia溶液使三價鐵離子從蛋白質中被稀鹽酸分離出來,三價鐵與亞鐵氰
化鉀反應,生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵氰化物普魯士藍,所以該反應被稱
為普魯士藍反應。三價鐵的亞鐵氰化物是一種很穩(wěn)定的化合物,在反應后可用紅色染色劑進
行復染,如核固紅、伊紅、中性紅等。
Perls stain 常用于顯示局部組織內各種出血性病變,常見于吞噬細胞內。在判斷含鐵血
黃素沉積時,用Perls 反應可以得到證實,該染色方法可以很好的區(qū)分含鐵血黃素和其他色
素。該染色液穩(wěn)定性好、可以*保存、不易產(chǎn)生沉淀、應用范圍廣、可以進行復染。
普魯士藍染色試劑盒(Perls stain,伊紅法),其復染液采用伊紅染色液,也是常用的復
染液,該復染液染色時間較核固紅染色液要短。
普魯士藍染色試劑盒組成:
Perls stain A
Perls stain B
臨用前,取A1、A2 等量混合,即為試劑(A)Perls stain,不宜提前配制。、
試劑(B): 伊紅染色
液 50ml
使用說明書
主要成分:
試劑(A): 主要由亞鐵qing hua jia、稀酸等組成。
試劑(B): 主要由伊紅、防腐劑等組成。
自備材料:
1、10%的中性福爾馬林
2、系列乙醇
3、蒸餾水
4、4%的多聚甲醛
普魯士藍染色試劑盒操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色
1、 切片脫蠟至水
① 二甲苯(Ⅰ) 5~10min
② 二甲苯(Ⅱ) 5~10min
③無水乙醇(Ⅰ)(可選) 3~5min
④無水乙醇(Ⅱ)(可選) 3~5min
⑤95%的乙醇 3~5min
⑥90%的乙醇 3~5min
⑦80%的乙醇 3~5min
⑧自來水或蒸餾水沖洗(Ⅰ) 1~3min
⑨自來水或蒸餾水沖洗(Ⅱ) 1~3min
2、染色
①切片入Perls stain(見注意事項6) 15~30min
②蒸餾水充分沖洗 5~10min
③伊紅染色液淡染細胞核 15~30s
④自來水沖洗 1~5s
3、脫水、透明、封固
①90%乙醇 10~20s
②95%乙醇(Ⅰ) 1~2min
③95%乙醇(Ⅱ) 1~2min
④ 無水乙醇(Ⅰ) 2~3min
⑤無水乙醇(Ⅱ) 2~3min
⑥ 二甲苯(Ⅰ) 2~3min
⑦二甲苯(Ⅱ) 2~3min
⑧ 二甲苯(Ⅲ) 2~3min
⑨中性樹脂封片。
(二)冰凍切片染色
1、 無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。
2、 染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。
(三)細胞染色
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗2 次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2 次,每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟。
染.結果:
含鐵血黃素或三價鐵 藍色
細胞核、其他組織 紅色
陰性對照(可選)
取相同連續(xù)切片脫蠟至水。置于5%的草酸中,孵育2-6h 后,經(jīng)Perla stain,需要步驟
同上。結果為陰性。
普魯士藍染色試劑盒注意事項:
1、 切片脫蠟應盡量干凈。
2、 組織固定常采用10%的中性福爾馬林,經(jīng)普通福爾馬林*固定后,組織會有損傷。
3、 臨用前取A1、A2 液等量混合,即為試劑(A),現(xiàn)配現(xiàn)用,不可提前配制。
4、整個操作過程中容器要干凈,避免使用金屬鐵制品,洗切片和容器時以蒸餾水為宜,因
普通水內含鐵質。
5、避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。
6、Perls stain 染色時,應根據(jù)樣品情況調整著色時間。
7、 所有檢查切片都應使用同一個陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要.尸檢肺組織是一
個很好的對照,包含相當數(shù)量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞).
8、95%乙醇、90%乙醇應經(jīng)常更換新液.
9、 冰凍切片和細胞的染色,應根據(jù)具體情況摸索實驗條件.
10、 為了您的健康和安全,請穿實驗服并戴一次性手套操作.
普魯士藍染色試劑盒有效期:12個月
科研領域普魯士藍染色試劑盒(Perls stain)
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