GelRed,GelGreen核酸染料,Evagreen飽和染料,qPCR Master Mix飽和染料預(yù)混液,HRM(高分辨率溶解曲線)專用預(yù)混液,CY3CY5及其升級穩(wěn)定版CF系列熒光染料,AccuBlue dsDNA定量試劑盒,Mix-n-stain抗體標(biāo)記,NucView Caspase 3/7底物,Annexin V 偶聯(lián)物,RedDotTM 核復(fù)染劑,細胞凋亡相關(guān)試劑盒、生物酶活底物、離子指示劑等
由美國Biotium公司研發(fā)的GelRed和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的的熒光核酸染色試劑。其水溶染色劑通過美國*安全認定,廢棄物可直接倒入下水道,而不會造成任何環(huán)境污染。
目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料(凝膠染色試劑)總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不*令人滿意。例如,雖然 EB(溴化乙啶)作為目前使用zui廣泛的核酸凝膠染色試劑,能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度,但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì),對人體潛在危害非常大。而且EB染色后會產(chǎn)生較高的背景熒光信號(如圖1)。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為zui靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會快速降解,穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認為是較為安全的核酸染料 ,但它的染色效果還遠不及 SYBR Green I 。 常用的染色方法有預(yù)制凝膠染色(前染)和凝膠電泳后染色(后染),無論采用哪一種方法,GelRed 和 GelGreen,都能表現(xiàn)出*的靈敏度。 為配合302/312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計的 GelRed ,按照Biotium公司創(chuàng)新的試驗步驟(該試驗步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液),在凝膠電泳后染色法中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同, GelRed 在預(yù)制凝膠法中使用時仍然有*的靈敏度,事實上GelRed 在檢測低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度,尤其對小分子量的 DNA 檢測非常靈敏
如果您使用 488 nm 激光器或者LED可見光激成像儀,GelGreen染料則是*選擇。 GelGreen 無論是在預(yù)制凝膠(前染)還是凝膠電泳后染色(后染)中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng),但不存在后者的不穩(wěn)定性問題。
實際上, GelRed 和 GelGreen ,特別是 GelRed 非常穩(wěn)定,可以*在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時甚至可以使用微波爐加熱,便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。而含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備,并*保存以備用。
更重要的是, GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 大大提高了安全性。 獨立的測試服務(wù)公司( Litron Laboratories, Inc. )進行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測試結(jié)果表明, 在 18.5 μ g /mL (該濃度遠高于*用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 )濃度下, GelGreen 沒有誘變性,而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細胞膜進入細胞,正是這一特性降低了染料的細胞毒性。如圖3。相反, SYBR Green I 廣泛地用于活細胞線粒體和核 DNA 染色,這正是由于它能快速的被細胞吞入。由于已知 SYBR Green I 對紫外線導(dǎo)致的突變有強烈的增強作用( Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001) ),因此它的高細胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。
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