HCC827細(xì)胞，人非小肺癌細(xì)胞，栩冉生物 簡(jiǎn)介：全國(guó)統(tǒng)一價(jià)格，全國(guó)各地均可發(fā)貨，遠(yuǎn)到香港、澳門、福建、新疆、內(nèi)蒙古等地。

產(chǎn)品名稱：HCC827細(xì)胞，人非小肺癌細(xì)胞

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

細(xì)胞規(guī)格：株

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：無支原體、無污染、符合標(biāo)準(zhǔn)

運(yùn)輸方式：新鮮運(yùn)輸和凍存管運(yùn)輸

貨期：新鮮運(yùn)輸需要1-2周，凍存管運(yùn)輸?shù)男枰?-3天

：/18916413500

HCC827細(xì)胞，人非小肺癌細(xì)胞，栩冉生物，質(zhì)粒的相關(guān)知識(shí)：
一.如何閱讀質(zhì)粒圖譜
*步：首先看 Ori 的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）。
第二步：再看篩選標(biāo)記，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。
--Ampr   水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性；
--tetr   可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞；
--camr   生成氯霉素羥乙?；苌铮怪ザ拘裕?/span>
--neor(kanr)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418（長(zhǎng)那霉素衍生物）失活；
--hygr   使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位點(diǎn)（MCS）。它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)，便于外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活，從而便于篩選。MCS決定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源DNA插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長(zhǎng)，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。
第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，這是用來區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體。在克隆載體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用哪種載體，要以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑橐罁?jù)。
二.如何選擇載體
把目的基因通過基因工程手段送到生物細(xì)胞（受體細(xì)胞），需要運(yùn)載工具（交通工具）攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，這種運(yùn)載工具就叫做載體（vector）?；蚬こ趟玫膙ector實(shí)際上是用來攜帶目的基因片段進(jìn)入受體細(xì)胞的 DNA。
選擇載體主要依據(jù)構(gòu)建的目的，同時(shí)要考慮載體中應(yīng)有合適的限制酶切位點(diǎn)。如果構(gòu)建的目的是要表達(dá)一個(gè)特定的基因，則要選擇合適的表達(dá)載體。
，載體選擇主要考慮下述3點(diǎn)：
1. 構(gòu)建DNA重組體的目的：克隆載體/表達(dá)載體。
2. 載體的類型：
克隆載體的克隆能力：根據(jù)克隆片段大?。ù筮x大，小選?。?。如<10kb選質(zhì)粒。
表達(dá)載體：根據(jù)受體細(xì)胞類型：原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳類細(xì)胞表達(dá)載體。
原核表達(dá)載體要選擇合適的啟動(dòng)子及相應(yīng)的受體菌；表達(dá)真核蛋白時(shí)需注意閱讀框錯(cuò)位問題；表達(dá)天然蛋白和融合蛋白所需載體亦有區(qū)別。
3. 選用質(zhì)粒做載體的4點(diǎn)要求：
（1）選分子量小的質(zhì)粒，即小載體（1~1.5 kb）：不易損壞，在細(xì)菌里面拷貝數(shù)也多（也有大載體）；
（2）一般使用松弛型質(zhì)粒在細(xì)菌里擴(kuò)增不受約束，一般10個(gè)以上的拷貝，而嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒<10個(gè)。
（3）必需具備一個(gè)以上的酶切位點(diǎn)，有選擇的余地；
（4）必需有易檢測(cè)的標(biāo)記，多是抗生素的抗性基因。
無論選用哪種載體，首先都要獲得載體分子，然后采用適當(dāng)?shù)南拗泼笇⑤d體DNA進(jìn)行切割，獲得載體片段，以便于與目的基因片段進(jìn)行連接。

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