昆蟲卵巢細(xì)胞；Sf21說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 昆蟲卵巢細(xì)胞；Sf21說明書
形態(tài)特性  圓形，多形
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細(xì)胞系源于雌性草地貪夜蛾蛹的卵巢組織，是Sf9細(xì)胞的克隆系，可以用于昆蟲病毒的基礎(chǔ)研究和復(fù)制桿狀病毒表達(dá)載體。 
培養(yǎng)條件  Grace's Insect Medium (GIM w/o BSA, FCS, Whole Egg Ultrafiltrate)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C11
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺細(xì)胞 Human
鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus
蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis
SW 1353(人骨肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
溝腸桿菌 Enterobacter cloacae
牛糞枝孢 Cladosporium stercorarium
膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記） Mouse
異常畢赤酵母 Pichia anomala
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
HPAC(人胰腺腺泡上皮)5×106cells/瓶×2
瑞士桿菌 Lactobacillus helveticus
刺孢吸水鏈霉菌北京變種 Streptomyces hygrospinosus var. beigingenis
大鼠腎小管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
BC-019(人腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum
根瘤菌 Rhizobium sp.CUPROUS TRIFLUOROMETHANESULFONATE TOLUENE COMPLEX    三烷磺酸亞銅絡(luò)合物（2:1）    48209-28-5
Disodium pytophosphate    焦磷酸二氫二    7758-16-9
2-Methyl-4,6-dinitrophenol    4,6-二基鄰酚    534-52-1
Bis(4-amino-2-chloro-3,5-diethylphenyl)methane    4,4'-亞基雙(3--2,6-二乙基胺)    106246-33-7
FETAL BOVINE SERUM USA ORIGIN    胎牛血清    
2,8-BIS(TRIFLUOROMETHYL)-4-BROMOQUINOLINE    4-溴-2,8-二(三基)喹啉    35853-45-3
N,N,N',N'-TETRAKIS(2-HYDROXYETHYL)ETHYLENEDIAMINE    N,N,N',N'-四(2-羥乙基)乙    140-07-8
2-Chloro-4-hydroxypyridine    2--4-羥基吡啶    17368-12-6
METHYL 3-MORPHOLINOPROPIONATE    4-啉丙酸酯    33611-43-7
Tetrahydropyran    四氫吡喃    142-68-7
3,5-Dichlorobenzylamine    3,5-二芐胺    39989-43-0
Ethyl (4-methylthiophenyl)acetate    4-硫基乙酸乙酯    14062-27-2
2-N-HEXYLCYCLOPENTANONE    2-己基環(huán)    13074-65-2
L-Asparagine tert-butyl ester    L-天冬酰胺叔丁酯    25456-86-4
4-Nitrotoluene    對(duì)基    99-99-0
tert-Butyl carbazate    叔丁氧羰基肼    870-46-2
2-Methylpyrimidine    2-基嘧啶    5053-43-0
Protopine    原阿片    130-86-9