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ATPase染色液(鈣鈷法)/染色劑
產品貨號:G2380
供應商:Solarbio
產品規(guī)格:5×50ml/盒
有效期:6 個月有效
ATPase染色液(鈣鈷法)/染色劑 試劑盒組成:
試劑(A): 堿性預孵育液 50ml RT 避光
試劑(B): 酸性預孵育液 50ml RT
試劑(C): ATPase 孵育液 50ml 4℃ 避光
試劑(D): 硝酸鈷溶液 50ml RT
試劑(E): ALP 硫化溶液 2×1ml RT 避光
試劑(F): ATPase 對照液 10ml 4℃ 避光
ATPase染色液(鈣鈷法)/染色劑產品說明 :
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase,ATPase)是一種水解酶,是催化 ATP 合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase 能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵,因而釋放大量能量。其催化反應如下:A-P-P-P + H 2 O→A-P-P + H 3 PO 4 +能量。
ATPase染色液(鈣鈷法)/染色劑原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸,磷酸根與鈣離子結合為磷酸鈣沉淀,再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷,終產物為黑色硫化鈷沉淀。
ATPase染色液(鈣鈷法)/染色劑操作步驟( ( 僅供參考) ) :
1. 冰凍切片直接入蒸餾水。
2. 一張切片入堿性預孵育液室溫孵育 15min。另一張切片入酸性預孵育液室溫孵育 5min,再入堿性預孵育液 30s。
3. 切片同時入 ATPase 孵育液,孵育 30-45min。
4. 1%氯化鈣洗三次,每次 1min。。
5. 入硝酸鈷溶液 3min,蒸餾水充分洗 4-5 次,流水沖洗 2min。
6. 在上述過程中配制 ALP 硫化工作液,即取試劑(E)用蒸餾水稀釋 50 倍, 即為 ALP 硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液孵育 1-2min。
7. 流水洗 10min 后,入蒸餾水。
8. 切片經 95%乙醇溶液及無水乙醇脫水。二甲苯透明,樹膠封片。
ATPase染色液(鈣鈷法)/染色劑染色結果:
酶所在陽性部位 黑色硫化鈷沉淀
肌纖維分型:
肌纖維分型 堿性預孵育液 酸性預孵育液
Ⅰ型 + +++
ⅡA 型 +++ -
Ⅱ B 型 +++ -
Ⅱ C 型 +++ ++
陰性對照(可選):
1、取對照切片,用試劑(F)-ATPase 對照液進行孵育,并與用 ATPase 孵育液孵育的切片進行比較。
兩者反應相同部位可能有非特異性磷酸(單酯)酶存在,兩者不同部位才是 ATP 酶活性所在。
2、將切片入 80℃蒸餾水 10min,再與其他組織切片同時孵育,結果應為陰性。
注意事項:
1. 切片入孵育液前后不可用水沖洗。
2. 若要顯示肌肉 ATPase 新鮮組織必須速凍后切片。
3. 若要鑒別肌纖維所屬類型,好用連續(xù)冰凍切片。應減少切片在室溫暴露的時間。
4. ALP 孵育液、ALP 硫化液易失效,好分成小份儲存,一經開啟立即使用。
5. ALP 硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味,應小心操作。
6. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。