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通用SP檢測(cè)試劑盒 免疫組化試劑盒
品牌:Solarbio
貨號(hào):SP0041
別名 : 通用SP試劑盒 通用SP免疫組織化學(xué)試劑盒 通用SP超敏免疫組化試劑盒
規(guī)格:3ml;6ml;18ml
通用SP檢測(cè)試劑盒 免疫組化試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑盒適合于一抗為小鼠/兔 IgG 的免疫組化實(shí)驗(yàn) DAB 顯色。
SP 試劑盒是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),同親和素一樣,對(duì)生物素有的親和力,親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(PI=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。
操作步驟:(以石蠟切片為例)
1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室溫處理 5-10 分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗 3 次。
3.可選步聚:
a、熱修復(fù)抗原,將切片浸入 0.01M 檸檬酸鈉緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔 5-10 分鐘后,反復(fù) 1-2 次。冷卻后 PBS(pH7.2-7.6)洗滌 1-2 次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10 分鐘,PBS(pH7.2-7.4)洗滌 2-3 次。
c、跳過(guò)此步,直接進(jìn)入下一步。
4. 滴加封閉液,室溫 20 分鐘。甩去多余液體,免洗。
5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋(稀釋后的一抗 4℃可保存一周),也可另行購(gòu)買(mǎi)抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗 37℃ 孵育 1 小時(shí)左右或 20℃ 2 小時(shí)左右,也可 4℃過(guò)夜。PBS(pH7.2-7.4)洗滌 3次,每次 2 分鐘。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō),陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間;背景過(guò)高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)
6. 根據(jù)用量,用稀釋液將 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 濃縮液按 1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ulBio-羊抗小鼠/兔 IgG 濃縮液混勻,此工作液 4℃可保存一周)。滴加 Bio-羊抗小鼠/兔 IgG 工作液,20-37℃ 孵育 30 分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗滌 3 次,每次 2 分鐘。
7.根據(jù)使用量,用稀釋液將鏈酶親和素-POD 濃縮液按 1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入 10ul鏈酶親和素-POD 濃縮液混勻,此工作液 4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD 工作液,20-37℃,30 分鐘。PBS (pH7.2-7.4)洗滌 4 次,每次 5 分鐘。
8.DAB 顯色:根據(jù)用量,用 PBS(pH7.2-7.4)配制,按 1ml PBS 加入 50ul 20×DAB 顯色液 A,加入 50ul 20×DAB 顯色液 B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,一般在 5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。
9.蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。對(duì)于細(xì)胞爬片,固定后,PBS 漂洗兩次,再用 0.5% Triton X-100 室溫孵育 20 分鐘,PBS 漂洗兩次,3% H2O2 處理 15 分鐘;PBS 漂洗兩次,接上述第 4 步。對(duì)于冰凍切片,固定后,PBS 漂洗兩次,接上述第二步。
注意事項(xiàng):
如果染色背景過(guò)高,在 SP 反應(yīng)之后,DAB 顯色之前,用加有 0.01—0.02% TWEEN-20 的 PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片 4 次,PBS 洗 2 次,然后 DAB 顯色。
相關(guān)產(chǎn)品:
A1800 抗體稀釋液(普通型)
A1810 一抗稀釋液
A1820 HRP 標(biāo)記抗體稀釋液
P1110 4%組織細(xì)胞固定液
P2100 10×多聚賴氨酸
T8200 Triton X-100
P1032 20×PBS PH7.2-7.4
P1031 1×PBST PH7.2-7.4 0.01M
C1010 檸檬酸鈉緩沖液 0.01mol/L pH6.0
X1020 0.1%胰蛋白酶液消化液
G1080 Mayer'蘇木素染液(免疫組化)