北京ELISA檢測試劑盒，大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit操作方法

參數(shù)規(guī)格：

性狀：盒裝液體

貯藏條件：2-8℃低溫保存

有效期：6個月

特異性：【試劑盒】可同時檢測天然或重組的，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。

適用范圍：此試劑盒僅用于科研實驗，禁用于臨床

標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等。

常見問題：

1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴格操作，否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性.

2、 若不同批號試劑的不同組分（A液或酶工作液），或不同試劑的不同組分進行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。

3、 加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標本影響不大，但對閾值附近的標本影響*，建議校對加樣器。

4、 反應(yīng)時間的誤差，做大量標本時，*孔和zui后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。

5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動等影響液量的因素均可導致以上情況。高標準要求時應(yīng)使用加樣器。

6、 閾值附近實際上是個灰區(qū)（gray scale）,不能截然分為陰性、陽性，國外廠家均要求對這部分可疑標本進行奇數(shù)次復(fù)檢，以次數(shù)多者為準，如一次陽兩次陰zui后判為陰，但實際上是否為陰不好說，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過一段時間后再測。

7、 肉眼觀察稍顯色，酶標儀打印為陰性的標本在實際工作中是難以避免的，肉眼目測結(jié)果不可靠，應(yīng)以酶標儀判讀為準。

8、 由陰性變?yōu)閺婈栃栽蚨酁椴僮鬟^程中漏加試劑等有關(guān)。

北京ELISA檢測試劑盒，大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit操作方法

工作原理及自備設(shè)備：

ELISA技術(shù)原理是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。

自備設(shè)備有，蒸餾水，加樣器，振蕩器及磁力攪拌器，酶標儀，量筒，燒杯，吸水紙，坐標紙，溫育箱，洗瓶，一次性試劑管，微移液及其吸嘴等。

用3個質(zhì)控血清測定值即可進行質(zhì)控，當這組數(shù)據(jù)擴大到20次有效值時就可以計算RCV的X。質(zhì)量控制在整個過程中有著舉足輕重的關(guān)系，0.1%的不慎也會引起*的失敗。該試劑盒敏感度，其預(yù)包被微孔板的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10％。每一個產(chǎn)品都經(jīng)過嚴格交叉反應(yīng)和干擾測試及穩(wěn)定性試驗，均可滿足廣泛的檢測需求。我們嚴格按照標準生產(chǎn)方案組裝生產(chǎn)，配置完善的售后服務(wù)和免費的，可讓您無后顧之憂。

方法類型和操作步驟 ：

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。 　 

（一）雙抗體夾心法 

雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：  

（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。 

（2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。

（3）加酶標抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。

（4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原的定性或定量。

根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。 

（二）雙位點一步法 

在雙抗體夾心法測定抗原時，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步（圖15-5）。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時間，如應(yīng)用高親和力的單抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

在一步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實際含量。鉤狀效應(yīng)嚴重時甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

（三）間接法測抗體

間接法是檢測抗體zui常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。

（3）加酶標抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

（4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。

（四）競爭法

競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：

（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。

（2）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的機會，使酶標抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫后，酶標抗原與固相抗體的結(jié)合可達zui充分的量。洗滌。 　　

（3）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標抗原zui多，故顏色zui深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。

（五）捕獲法測IgM抗體 

血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。操作步驟如下：

（1）將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。

（2）加入稀釋的血清標本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。

（3）加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌。

北京ELISA檢測試劑盒，大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit操作方法

訂購說明：

 1. 現(xiàn)在國內(nèi)大部分市場在供應(yīng)著進口的試劑盒，在選擇公司這一方面就需要謹慎了，要選品質(zhì)、評價等方面較好的公司（如上海酶遠生物、上海酶遠生物等），可看它的產(chǎn)品目錄冊，一般提供的產(chǎn)品種類很有限，都是些常用指標，種類少說明是真貨，且外包裝較精美并提供公司的名稱、、地址，所有的試劑也都經(jīng)得起檢驗。

 2. 還有一個好的策略就是對照常規(guī)品種的指標，因為需要量較大，所以國內(nèi)公司會用心做研發(fā)，一般做的不錯，可以用國產(chǎn)的；對于不常用的指標，因為用量少，國內(nèi)公司一般不做研發(fā)（研發(fā)成本較高，需求量少），所以要用國外的品牌，如R&D、TSZ都是不錯的。國產(chǎn)和進口盒子一起用，節(jié)省經(jīng)費而且高性價比。