北京ELISA檢測(cè)試劑盒，大鼠抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA Kit說明書

參數(shù)規(guī)格：

性狀：盒裝液體

貯藏條件：2-8℃低溫保存

有效期：6個(gè)月

特異性：【試劑盒】可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

檢測(cè)種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等種屬。

適用范圍：此試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)，禁用于臨床

標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法以及BAS-ELISA等。

常見問題：

1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.

2、 若不同批號(hào)試劑的不同組分（A液或酶工作液），或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。

3、 加樣時(shí)樣品量誤差，對(duì)于陰或很陽的標(biāo)本影響不大，但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響*，建議校對(duì)加樣器。

4、 反應(yīng)時(shí)間的誤差，做大量標(biāo)本時(shí)，*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。

5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動(dòng)等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)應(yīng)使用加樣器。

6、 閾值附近實(shí)際上是個(gè)灰區(qū)（gray scale）,不能截然分為陰性、陽性，國外廠家均要求對(duì)這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢，以次數(shù)多者為準(zhǔn)，如一次陽兩次陰zui后判為陰，但實(shí)際上是否為陰不好說，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過一段時(shí)間后再測(cè)。

7、 肉眼觀察稍顯色，酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)際工作中是難以避免的，肉眼目測(cè)結(jié)果不可靠，應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。

8、 由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽性原因多為操作過程中漏加試劑等有關(guān)。

北京ELISA檢測(cè)試劑盒，大鼠抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA Kit說明書

工作原理及自備設(shè)備：

ELISA技術(shù)原理是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。

自備設(shè)備有，蒸餾水，加樣器，振蕩器及磁力攪拌器，酶標(biāo)儀，量筒，燒杯，吸水紙，坐標(biāo)紙，溫育箱，洗瓶，一次性試劑管，微移液及其吸嘴等。

用3個(gè)質(zhì)控血清測(cè)定值即可進(jìn)行質(zhì)控，當(dāng)這組數(shù)據(jù)擴(kuò)大到20次有效值時(shí)就可以計(jì)算RCV的X。質(zhì)量控制在整個(gè)過程中有著舉足輕重的關(guān)系，0.1%的不慎也會(huì)引起*的失敗。該試劑盒敏感度，其預(yù)包被微孔板的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10％。每一個(gè)產(chǎn)品都經(jīng)過嚴(yán)格交叉反應(yīng)和干擾測(cè)試及穩(wěn)定性試驗(yàn)，均可滿足廣泛的檢測(cè)需求。我們嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)方案組裝生產(chǎn)，配置完善的售后服務(wù)和免費(fèi)的，可讓您無后顧之憂。

方法類型和操作步驟 ：

ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標(biāo)記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。 　 

（一）雙抗體夾心法 

雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法，操作步驟如下：  

（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。 

（2）加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。

（3）加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。

（4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。 

（二）雙位點(diǎn)一步法 

在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步（圖15-5）。這種雙位點(diǎn)一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。

在一步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

（三）間接法測(cè)抗體

間接法是檢測(cè)抗體zui常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。

（3）加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體，可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。

（4）加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。

（四）競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，受檢抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：

（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。

（2）待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原，保溫后，酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)zui充分的量。洗滌。 　　

（3）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原zui多，故顏色zui深。參考管顏色深度與待測(cè)管顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管顏色越淡，表示標(biāo)本中抗原含量越多。

（五）捕獲法測(cè)IgM抗體 

血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定特異性IgM。操作步驟如下：

（1）將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。

（2）加入稀釋的血清標(biāo)本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。

（3）加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌。

北京ELISA檢測(cè)試劑盒，大鼠抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA Kit說明書

訂購說明：

 1. 現(xiàn)在國內(nèi)大部分市場(chǎng)在供應(yīng)著進(jìn)口的試劑盒，在選擇公司這一方面就需要謹(jǐn)慎了，要選品質(zhì)、評(píng)價(jià)等方面較好的公司（如上海酶遠(yuǎn)生物、上海酶遠(yuǎn)生物等），可看它的產(chǎn)品目錄冊(cè)，一般提供的產(chǎn)品種類很有限，都是些常用指標(biāo)，種類少說明是真貨，且外包裝較精美并提供公司的名稱、、地址，所有的試劑也都經(jīng)得起檢驗(yàn)。

 2. 還有一個(gè)好的策略就是對(duì)照常規(guī)品種的指標(biāo)，因?yàn)樾枰枯^大，所以國內(nèi)公司會(huì)用心做研發(fā)，一般做的不錯(cuò)，可以用國產(chǎn)的；對(duì)于不常用的指標(biāo)，因?yàn)橛昧可伲瑖鴥?nèi)公司一般不做研發(fā)（研發(fā)成本較高，需求量少），所以要用國外的品牌，如R&D、TSZ都是不錯(cuò)的。國產(chǎn)和進(jìn)口盒子一起用，節(jié)省經(jīng)費(fèi)而且高性價(jià)比。