Gibco澳洲胎牛血清滅活時溫度問題。

1、問：因為實驗室水浴鍋失控，血清滅活時，溫度到了61.7℃，這血清還能用嗎？

答：多長時間啊？短時間應(yīng)該可以吧，我有一次加熱了一個多小時，還照樣用。

2、問：我滅活胎牛血清時，用的電磁爐，定在了70℃，本來說調(diào)溫度到56℃再放血清的，后來忘了，就把 血清放進去了，所以滅活的溫度肯定超過56℃了，不知道這樣對血清有沒有影響？

答：常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中zui常用的手法是56℃ 熱處理30分鐘?？纯茨沭B(yǎng)的細(xì)胞是什么，一般的話估計問題不大，要是很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點啊。熱滅活目的是 為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)， 在對補體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作 用。現(xiàn)在好像不主張熱滅活，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面影響，對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，此外 ，有研究結(jié)果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用。

10099141胎牛血清澳洲血源使用介紹：

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，zui常使用Gibco澳洲胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達譜，影響后續(xù)實驗的結(jié)果，我們在實驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的Gibco FBS或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體 細(xì)胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。

Gibco澳洲血清保存方法

1、需要*保存的Gibco澳洲胎牛血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

2、一般廠商提供的Gibco澳洲血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾血清。

3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體 參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

5、Gibco澳洲血清10099141中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑 點不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。

10099141胎牛血清澳洲血源

Gibco胎牛血清使用中遇到的常見問題總結(jié)

一、血清滅活問題。

1、問：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實驗了。

2、問：Gibco澳洲胎牛血清141滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，Gibco澳洲胎牛血清要滅活嗎？

答：Gibco澳洲胎牛血清有專門的熱滅活型號，貨號是10100147。

4、問：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因為血清中可能有些補體和抗體，是不是會影 響轉(zhuǎn)染？我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結(jié)合，影響轉(zhuǎn)染，正確嗎？細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞， 病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾，一般是2-6小時，根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補體滅活 ！這要根據(jù)實際情況而定，如果沒有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個小時。

5、問：(1)我買的是Gibco北美胎牛血清，要滅活嗎？有些說法是需要，有些說直接解凍后就可以加入到培 養(yǎng)基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有關(guān)系嗎？

答：關(guān)于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實驗室將血清的熱滅活還是作為 常規(guī)來執(zhí)行，因為有兩個作用，*是滅活補體，第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處 理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響。

我在實驗室處理Gibco血清10099141的時候，有一次水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀 ，我重新處理了另外一份血清，將兩份血清對比，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以 上，肯定也會對里面的蛋白起到破壞作用。下次有機會我做個延長滅活時間的實驗試試，看看到底有多大的影響。熱 滅活之后，血清放在四度冰箱久了，就會有沉淀產(chǎn)生，這常常會被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗證到 底有沒有污染，常常又會把血清放置37℃溫育，但是血清中的蛋白會進一步析出，zui后還是要做鏡檢，無菌培養(yǎng)試驗 ，和革蘭氏染色試驗，非常麻煩。

我看過一份資料，里面提到70%的實驗者認(rèn)為滅活是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間， 而時間則從15分鐘到60分鐘不等。其中zui常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高 ，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效 性和必要性。有人比較過11個不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個細(xì)胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纖維細(xì)胞，MRC-5) 的生長帶來負(fù)面影響，三個細(xì)胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響，而只有兩個細(xì)胞株(Balb/3T3， Sp2/0Ag14 hybrid)，在熱滅活之后，細(xì)胞生長有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細(xì)胞的生長沒 有明顯的促進作用。

你可以摸索一下，將Gibco血清10099-141從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍，然后混勻分裝成兩份，一份滅活，一份不滅活 ，比較這兩種血清對細(xì)胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個過程zui多也就一個星期。同時你還要考慮 血清滅活與否對你后續(xù)的實驗有沒有影響。

問：(2)分裝后的血清從-20℃取出放4℃讓其液化，卻見Gibco血清141比較混濁，有沉淀產(chǎn)生，這屬正常嗎？

答：正常。

Standard（標(biāo)準(zhǔn)） Gibcozui普通級胎牛血清，適合于較容易培養(yǎng)的細(xì)胞。
  來源 目錄號 規(guī)格 備注
胎牛血清，Qualified USDA-approved regions 10437028 500 mL  
10438026 500 mL 熱滅活
南美洲 10270106 500 mL  
10500064 500 mL 熱滅活
加拿大 12483020 500 mL  
12484028 500 mL 熱滅活
Performance（優(yōu)） Gibco低內(nèi)毒素血清，用于普通細(xì)胞系的常規(guī)培養(yǎng)，比標(biāo)準(zhǔn)級胎牛血清質(zhì)量要好。
  來源 目錄號 規(guī)格 備注
胎牛血清，Qualified 美國，北美 26140079 500 mL  
16140071 500 mL 熱滅活
Performance Plus（優(yōu)+） Gibco zui低內(nèi)毒素血清，通過內(nèi)激素和多種生化檢測，適用于廣泛的細(xì)胞系培養(yǎng)，尤其適合敏感細(xì)胞系的日常培養(yǎng)。
  來源 目錄號 規(guī)格 備注
胎牛血清，Certified 美國，北美 16000044 500 mL  
10082147 500 mL 熱滅活
Secure（*） Gibco血清，來源于無瘋牛病疫情（BSE-Free）區(qū)域，低內(nèi)毒素，適用于要求病毒感染風(fēng)險zui低的細(xì)胞培養(yǎng)。
  來源 目錄號 規(guī)格 備注
胎牛血清，Qualified 澳大利亞，澳洲 10099141 500 mL  
10100147 500 mL 熱滅活
新西蘭 10091148 500 mL  
10093177 500 mL 熱滅活
新生牛血清 新西蘭 16010159 500 mL  
26010074 500 mL 熱滅活
小牛血清 16170078 500 mL  
26170043 500 mL 熱滅活
供體牛血清（Donor Bovine Serum w/Iron） 10371029 500 mL  
供體牛血清（Donor Bovine Serum） 16030074 500 mL  
Specialty（） Gibco血清，適用于有特殊要求和特殊實驗研究的細(xì)胞培養(yǎng)。
  來源 目錄號 規(guī)格 備注
胚胎干細(xì)胞胎牛血清（ES胎牛血清，Embryonic Stem Cell Qualified） 美國，北美 10439024 500 mL  
新西蘭 16141079 500 mL  
間充質(zhì)干細(xì)胞胎牛血清（Mesenchymal Stem Cell Qualified） USDA-approved regions 12662029 500 mL  
新西蘭 12665022 500 mL  
澳大利亞，澳洲 12664025 500 mL  
活性炭處理胎牛血清(碳吸附處理胎牛血清) USDA-approved regions 12676029 500 mL  
透析型胎牛血清 美國，北美 26400044 500 mL  
新西蘭 30067334 500 mL  
外泌體清除胎牛血清（Exosome-Depleted） 美國，北美 A2720801 500 mL  
超低IGg胎牛血清 美國，北美 16250078 500 mL  
新西蘭 1921005PJ 500 mL  
馬血清 新西蘭 16050122 500 mL  
26050088 500 mL 熱滅活
羔羊血清（Lamb Serum） 16070096 500 mL  
雞血清 16110082 500 mL  
山羊血清（Goat Serum） 16210072 500 mL  
豬血清 26250084 500 mL  
兔血清 美國，北美 16120107 500 mL