細(xì)胞名稱  正常大鼠腎細(xì)胞；NRK培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣

品牌 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 NRK細(xì)胞系衍生自正常鼠腎組織，能在多種培養(yǎng)基中常規(guī)傳化。該細(xì)胞用于細(xì)胞毒性試驗(yàn)、生長(zhǎng)效力測(cè)定，是藥物評(píng)估的首細(xì)胞系。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法 1：

3傳代,2-3天傳一代  

傳代情況 C57

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測(cè) 陰性　

STR STR鑒定

同工酶

染色?
正常大鼠腎細(xì)胞；NRK培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
Anti-HSD11B2/HSD2 /FITC 熒光素標(biāo)記羥基類固醇脫氫酶11β2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Tubulin- Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh 5-HTR2A 5-羥色胺受體2A抗體 規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-rat IgG/Bio 生物素標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml

GRK6 英文名稱： G蛋白偶聯(lián)受體激酶6抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh PTHrP/PTHLH 甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-Tubulin- Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
LTB4(Human Leukotriene B4) ELISA Kit 人白三烯B4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-MMP-20 基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Integrin β2/CD18/LFA-1 整合素β2抗體 規(guī)格 0.1ml

VEGF-D ELISA Kit 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D 96T

PITX2 英文名稱： 成對(duì)樣同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子2抗體 0.2ml

Collagen II 英文名稱： Ⅱ型膠原蛋白抗體 0.1ml

Anti-MMP-20 基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml

Cobra poison Protein 英文名稱： 眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化核因子κB激酶alpha/beta抑制劑抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit anti-MG IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG 規(guī)格 0.5ml

Anti-pro-caspase3/FITC 熒光素標(biāo)記半胱天冬酶-3酶原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
E2(Mouse Estradiol)ELISA Kit 小鼠雌二醇Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-COX-1/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Desmoglein 3/DSG3 橋粒芯蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml

Dog IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記狗IgM 0.3ml

Lxn/Latexin 英文名稱： 羧肽酶抑制劑抗體 0.1ml

呋喃西林代謝物檢測(cè)試劑盒 96孔/盒 各種動(dòng)物組織/水產(chǎn)/蜂蜜

Anti-COX-1/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。