過氧化氫酶(CAT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
- 公司名稱 上海滬鼎生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2018/11/21 13:39:19
- 訪問次數(shù) 1021
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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過氧化氫酶(CAT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:3.5 IU/L -160 IU
規(guī)格:96T
使用目的:本試劑盒用于測定土壤樣本中過氧化氫酶(CAT)活性。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中過氧化氫酶(CAT)水平。用純化的過氧化氫酶
(CAT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入過氧化氫酶(CAT),
再與 HRP 標記的過氧化氫酶(CAT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*
洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最
終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化氫酶(CAT)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長
下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中過氧化氫酶(CAT)活性濃度。
試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標準品(1600 U/L) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
標本要求
1. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
800U/L | 5 號標準品 | 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
400U/L | 4 號標準品 | 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
200U/L | 3 號標準品 | 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
100U/L | 2 號標準品 | 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
50U/L | 1 號標準品 | 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期
1. 試劑盒保存:2-8℃。
2. 有效期:6 個月