NanoPro 1000 超微量蛋白磷酸化分析系統(tǒng)

在細(xì)胞生物學(xué)功能研究中，有許多常規(guī)的研究手段,如流式,生物質(zhì)譜,雙向電泳,蛋白芯片等技術(shù)。隨著研究的深入，科學(xué)家們特別需求進(jìn)行真正意義上的高靈敏,高精度研究手段，力求通過(guò)一次實(shí)驗(yàn)，快速發(fā)現(xiàn)更多的信息：鑒定結(jié)果更為可信，靈敏度更加提高來(lái)鑒定更多低豐度蛋白，更多的修飾信息，結(jié)構(gòu)信息等。傳統(tǒng)分析技術(shù)具有很多局限性,如雙向凝膠電泳(2DE),對(duì)疏水性蛋白、堿性蛋白、特別是低豐度蛋白等無(wú)能為力，成為蛋白質(zhì)組研究的瓶頸;而質(zhì)譜分析技術(shù)也是由于靈敏度等問(wèn)題,需要大量的樣品等原因,十幾年來(lái)一直對(duì)研究低豐度調(diào)控蛋白缺乏信心.

相同的Western, 不同的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

另外, 傳統(tǒng)蛋白分析技術(shù)所用的蛋白量需來(lái)自成千上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。所得結(jié)果分辨率及重復(fù)性不理想。各種蛋白分析法所需樣品量如下：

1.質(zhì)譜儀樣品量100000 個(gè)細(xì)胞
2.細(xì)胞儀樣品量：10000 個(gè)細(xì)胞
3蛋白電泳，樣品量：5000 個(gè)細(xì)胞
4.蛋白芯片樣品量：1000個(gè)細(xì)胞

ProteinSimple公司的NanoPro 1000 超微量蛋白磷酸化分析系統(tǒng)為蛋白功能和信號(hào)通路研究提供了一個(gè)全新的研究方案。傳統(tǒng)的蛋白研究方法需要成千上萬(wàn)的細(xì)胞，而NanoPro 1000系統(tǒng)每次分析僅需要25個(gè)細(xì)胞。
并可對(duì)超微量珍貴樣品的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白之特性直接檢測(cè)，適用各種樣品包括：
1.原代細(xì)胞
2.FACS 分選細(xì)胞
3.穿刺抽取之腫瘤細(xì)胞
4.顯微切片組織細(xì)胞
5.分離的干細(xì)胞群

系統(tǒng)利用毛細(xì)管樣品定位及分析技術(shù),結(jié)合毛細(xì)管分離及化學(xué)發(fā)光檢測(cè)原理進(jìn)行納米級(jí)的自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)，避免了人為操作誤差，有效提高檢測(cè)結(jié)果的精確性和重復(fù)性。過(guò)去蛋白檢測(cè)儀無(wú)法檢測(cè)到的信息，如細(xì)胞內(nèi)控制通路的調(diào)控信息，可由此精確測(cè)得。
技術(shù)被用來(lái)分析信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中所涉及的蛋白構(gòu)象上的極細(xì)微變化。Nano1000為結(jié)構(gòu)緊湊的臺(tái)式分析系統(tǒng)。
從新的角度分析蛋白調(diào)控機(jī)制，Nano技術(shù)采用等電點(diǎn)電泳的方法將不同構(gòu)象的蛋白分離。該方法大大推進(jìn)了多個(gè)領(lǐng)域的研究，包括：
藥物開發(fā)-篩選激酶抑制劑藥物的作用靶點(diǎn)
生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)-觀察疾病引起的蛋白構(gòu)象的細(xì)微變化，研究其發(fā)病機(jī)制
腫瘤蛋白活性-研究組織和細(xì)胞中腫瘤蛋白的調(diào)控機(jī)制翻譯后修飾的研究-檢測(cè)蛋白構(gòu)象改變引起的等電點(diǎn)極細(xì)微的變化

1000將蛋白分離與檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合:
將毛細(xì)管等電點(diǎn)電泳和化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定這兩種常用的蛋白檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合。等電點(diǎn)電泳可將不同構(gòu)象的蛋白分離。分離后蛋白被儀器固定在毛細(xì)管壁上，接著用化學(xué)發(fā)光免疫的方法檢測(cè)蛋白。這為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的檢測(cè)提供了新的視角。


【操作流程】
1.上樣
每個(gè)毛細(xì)管中加400nl樣本混合物，包括樣本、熒光標(biāo)記PI和兩性電解質(zhì)。
2.分離
毛細(xì)管兩端加電壓，樣本中的蛋白質(zhì)隨著自身等電點(diǎn)的不同，加以分離。
3.固定
毛細(xì)管在紫外光照射下，其毛細(xì)管壁上的‘化學(xué)物質(zhì)被激活，從而將分離的蛋白異構(gòu)體固定在毛細(xì)管壁上。
4.免疫標(biāo)記
用洗脫液將非特異結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫，將固定的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng)，加入發(fā)光催化劑誘導(dǎo)其化學(xué)發(fā)光，發(fā)光信號(hào)被CCD攝像機(jī)拍攝下來(lái)。
5.結(jié)果分析
通過(guò)專業(yè)的軟件，對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析