一、Gibco 胎牛血清質量檢定指標：

1、化學檢定：包括滲透壓（240～340）、pH（7.0～8.0）、總蛋白含量（3.5～5.0％）、血紅蛋白 （≤0.02％）

2、 微生物檢查：細菌和真菌——直接培養(yǎng)法、噬菌體——噬斑法和增殖法 支原體——培養(yǎng)法和DNA染色法 、牛病毒——細胞培養(yǎng)法。要求均為陰性

3、內毒素檢測——凝膠法和動態(tài)濁度法 要求內毒素含量≤10EU/ml

4、促細胞生長測定（SP2/0-Ag14標準規(guī)定）

1）zui大增殖濃度≥1.0×106個/ml、倍增時間≤20小時

克隆率＝（陽性孔平均數(shù)/培養(yǎng)孔總數(shù)）×100％

2）貼壁效率（ VERO細胞、二倍體細胞等）

10％血清――50或100個細胞/孔

貼壁效率（％）＝（每孔克隆平均數(shù)/每孔存活的培養(yǎng)細胞平均數(shù)）×100

相對貼壁效率＝被測血清貼壁效率/參考血清貼壁效

以上項目檢定結果應符合2005版《中國藥典》第三部的相關規(guī)定。血清廠家應在此基礎上結合疫苗病毒生產(chǎn)工藝建立企業(yè)內控檢定項目并建立相應的檢定方法，保證疫苗病毒生產(chǎn)的穩(wěn)定性，提高疫苗制品的質量。

二、Gibco 胎牛血清的分類：

根據(jù)牛出生時間和血清采制分離方法分為：

1.胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血；

2.新生牛血清：出生12～24小時新生牛靜脈采血；

3.高級新生牛血清：采血后靜置自然析出的血清；

4.標準新生牛血清：經(jīng)離心分離的血清；

5.普通新生牛血清：融血或微融血的血清；

6.小牛血清：出生三月齡小牛動脈采血分離血清。

三、牛血清在細胞培養(yǎng)基中的主要功能：

牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。

1、提供能促使細胞指數(shù)生長的激素、基礎培養(yǎng)基中沒有或含量微小的營養(yǎng)物，以及某些低分子營養(yǎng)物質；

2、提供結合蛋白，識別維生素、脂類、金屬離子，并與有毒金屬和熱源物質結合，起解毒作用；

3、是細胞貼壁、鋪展生長所需因子的來源；

4、起酸堿度緩沖液作用；

5、提供蛋白酶抑制劑，細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受損傷。

四、牛血清的質量要求：

（1）WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求

1. 牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家，并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)；

2.有些國家還要求牛血清來自沒有用過反芻動物蛋白飼料喂養(yǎng)的牛群；

3.要能證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物；

4.血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌；

5.無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無大腸桿菌噬菌體污染；

6.要求血清對細胞有良好的支持繁殖作用。

（2）我國在對牛血清的質量標準zui早在2000年版《中國生物制品主要原輔材料質控標準》中提出。包括物理性狀、總蛋白，血紅蛋白、細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素，支持細胞增殖檢查。2005版藥典頒布之后，小牛血清質量標準被納入《中國藥典》2005年版 第三部 生物制品分冊。

（3）美國對牛血清的質量要求：

Gibco 和Hyclone等美國主要血清供應商的牛血清都已進入到我國市場，他們對血清質量標準有嚴格要求，從血清來源到產(chǎn)品質量都有明確規(guī)定。

1、血清來源 ：可從世界各地收集胎牛血清，但必須符合其質量標準和美國農業(yè)部進口要求。

2、血清的收集：必須符合工業(yè)生產(chǎn)的標準，低溫采集，一次分離，分離后立即混合凍存。

3、血清的制備：超低IgG胎牛血清、透析血清、γ-射線輻照；

4、除菌過濾：0.22μm和0.1μm濾膜過濾；

5、成品分裝：根據(jù)需要分裝成不同規(guī)格。

五、牛血清的使用所產(chǎn)生的常見問題：

（1）由于血清營養(yǎng)豐富，貯存條件特殊，因此在貯存和使用過程中容易產(chǎn)生以下問題：

1、改變培養(yǎng)液的pH值

牛血清的pH理論值為7.0～8.0，培養(yǎng)基在加入規(guī)定量的碳酸氫鈉后（即達到細胞生長所需要的滲透壓），再加入10％的牛血清，一般會使培養(yǎng)液的pH值發(fā)生改變。因此在使用過程中應注意pH的變化，如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調pH到所需值。

2、由于血清的營養(yǎng)成分豐富，非常適合細菌、真菌和支原體等生長。國產(chǎn)血清大部分采用手工分裝，因此容易把微生物帶入而使得血清被污染。使用前如果沒有及時發(fā)現(xiàn)，將會把污染物帶入正在培養(yǎng)的細胞中，而使得細胞不能正常生長。

3、血清在貯存解凍過程中會產(chǎn)生沉淀，這是由于血清中含有大量脂蛋白、纖維蛋白及多肽類物質，在-15℃冷凍保存解凍后就會自然形成沉淀，隨著保存時間的延長，沉淀量會增加。因此在融化血清時一般應先在4℃放置使之解凍，然后放在室溫使血清融化，以避免沉淀的增加。添加血清時應避免把沉淀加入培養(yǎng)液，否則由于沉淀的存在會使得所培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生大量黑點，或者細胞表面將會覆蓋一層油狀物質，影響細胞的正常生長。為減少血清的損失，可以把有沉淀的血清收集起來進行離心處理，將上清液加入培養(yǎng)液使用（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。

（2）大規(guī)模細胞培養(yǎng)中牛血清對細胞及病毒滴度的影響

血清是一種成分復雜的混合物，不同批次血清對細胞生長的促進作用不同。大規(guī)模細胞培養(yǎng)中由血清引起的細胞生長狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響表現(xiàn)在以下幾個方面：

1、細胞生長速度緩慢，長滿單層時間長；從同一細胞瓶中分出兩瓶細胞，用同一種培養(yǎng)液，分別加入10％的對照血清和待檢血清，在相同條件下培養(yǎng)72小時，會出現(xiàn)對照血清長滿單層，而待檢血清大約只有60～70％，這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細胞。

2、細胞傳代后形態(tài)不正常，細胞狀態(tài)發(fā)生變化 ；由于血清的質量問題，使原本狀態(tài)正常的細胞經(jīng)傳代后形態(tài)會變差；比如：細胞瓶里會出現(xiàn)一些蠕動的小黑點（并非污染），或者細胞表面形成一層油狀覆蓋物；細胞的輪廓變得模糊，細胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細胞向四周擴展生長。

3、細胞傳幾代后就出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象，不能連續(xù)傳代 ；質量較差的血清缺乏某種細胞的貼壁因子，會使細胞在傳代過程中逐漸喪失貼壁的能力。細胞會從正常的貼壁狀態(tài)，上翹。觀察到的現(xiàn)象就是細胞表面不光滑，晃動細胞瓶會看到細胞表面有絮狀物隨培養(yǎng)液波動。隨著傳代次數(shù)增加，細胞weisuo的情況越來越嚴重，直到zui終脫壁而死亡。

4、細胞長的很好，致密的單層，狀態(tài)也很正常，但是接毒后細胞基本不發(fā)生病變，做滴度檢測幾乎測不出抗原滴度。這種情況也許是因為血清中含有與接種的病毒有同源的特異性抗體。比如血清中經(jīng)常會存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會把接進去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會被抗體中和，就沒病毒顆粒在細胞中增殖，所以會檢測不到病毒滴度。這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費，浪費人力、物力，尤其是時間上的浪費，從培養(yǎng)細胞開始到接病毒，到收液至少需要一兩個月，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時間就白白浪費掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風險之一。

5、細胞生長的狀態(tài)一般，產(chǎn)毒少，毒價低。這種情況比較常見，細胞是病毒的載體，由于血清質量不好，導致細胞生長狀態(tài)不好，病毒就無法進行正常的復制。并非病毒都不能復制，所以就造成疫苗的效價不夠，可能造成不合格產(chǎn)品。

看來一款血清直接關系細胞的生死存亡，不用擔心，上海青旗提供無支原體，低內毒素和低血紅素的，無反復凍融的高品質血清

上海青旗專業(yè)血清10年，提供無支原體、低內毒素、無反復凍融，清澈，清透，高品質進口血清

SERANA胎牛血清·Gibco胎牛血清·Sigma胎牛血清·Hyclone胎牛血清·Gemini胎牛血清·BOVOGEN胎牛血清·BI胎牛血清

六、常備現(xiàn)貨血清列表如下：

上海青旗獲得德國SERANA血清中國區(qū)代理商，誠招全國給地經(jīng)銷商                                                          

產(chǎn)品名稱         貨號         來源         規(guī)格         市場價格         備注                          

胎牛血清FBS  S-FBS-SA-011    SOUTH AMERICA     100ML      1100         較貴細胞，原代細胞，腫瘤細胞均可                          

胎牛血清FBS  S-FBS-SA-015    SOUTH AMERICA     500ML      2500         較貴細胞，原代細胞，腫瘤細胞均可                          

胎牛血清FBS  S-FBS-US-015   USA  500ML      4800         胚胎干細胞，神經(jīng)類細胞，昆蟲細胞，哺乳細胞等                          

超低IgG胎牛血清Ultra-low IgG FBS    S-FBS-SA-055    SOUTH AMERICA     500ML      5200                                    

透析胎牛血清Dialyzed FBS   S-FBS-US-065   USA  500ML      5800                                    

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清Charcoal Stripped FBS   S-FBS-AU-045   AUSTRALIA       500ML      5800

七、備注：

（1）SERANA血清生產(chǎn)原料均符合FDA及EC標準，公司通過了*。絕大多數(shù)來源的FBS通過EDQM(歐洲藥品質量管理局)認證。

（2）完整可追溯性：

　　從血清原料的收集直至zui終無菌過濾的產(chǎn)品，SERANA管理并記錄了所有相關的進程。這保證了從動物源直到終產(chǎn)品的完整可追溯性。SERANA為所有的客戶提供完整全面的批次記錄，包括原產(chǎn)地證明、健康證明、分析證書和其他批簽發(fā)記錄。

（3）血清產(chǎn)品的檢測和測試：

　　胎牛采集血清前，懷孕胎牛會按歐洲EU Regulation 999/2001規(guī)定進行BSE檢測，只有BSE檢測陰性的才被采集;胎牛血清經(jīng)3次100納米過濾，經(jīng)BVD、IBR、PI3等病毒檢測;細菌、真菌、支原體檢測;每一批胎牛血清都經(jīng)生長測試和克隆率測試，測試細胞包括：HeLa, L929, SP2/O-AG14, MRC-5,CHO and BHK。SERANA胎牛血清的內毒素含量非常低，有些批次甚至低于0.02 EU/ml;

（4）樣品的供應和批號的保留：

SERANA血清會按客戶的需求提供2-3個不同批次規(guī)格為50ml的免費樣品供客戶篩選，篩選合格的批次，SERANA會為客戶免費儲存12-18個月。

八、2014年獲得澳洲BOVOGEN中國江蘇、浙江、上海區(qū)一級代理權                                                                

產(chǎn)品名稱         貨號         來源         規(guī)格         市場價格         備注                          

胎牛血清FBS  SFBS SOUTH AMERICA     500ML      2600         較貴細胞，原代細胞，腫瘤細胞均可                          

胎牛血清FBS  SFBS AUSTRALIA       500ML      6000         胚胎干細胞，神經(jīng)類細胞，昆蟲細胞，哺乳細胞等                          

新生牛血清New born calf serum          SNCS         New Zealand   500ML      1300         腫瘤細胞、診斷、生產(chǎn)等            

九、相關Hyclone新生牛血清（貨號：SH30401.02） 高品質產(chǎn)品還有：

產(chǎn)品名稱         貨號         來源         規(guī)格         市場價格

胎牛血清FBS  10270-106        SOUTH AMERICA     500ML      3200

胎牛血清FBS  10270-106        SOUTH AMERICA     500ML      3200

胎牛血清FBS  c2027050          SOUTH AMERICA     500ML      2600

優(yōu)等胎牛血清FBS  10437-028        Mexico   500ML      3200

優(yōu)等胎牛血清FBS  10437-028        Mexico   500ML      3200

優(yōu)等胎牛血清FBS  10437-028        Mexico   500ML      3200

優(yōu)等胎牛血清FBS  10099-141        AUSTRALIA       500ML      7000

優(yōu)等胎牛血清FBS  10099-141        AUSTRALIA       500ML      7000

優(yōu)等胎牛血清FBS  10099-141        AUSTRALIA       500ML      7000

特級胎牛血清FBS  16000-044        USA  500ML      5800

特級胎牛血清FBS  16000-044        USA  500ML      5800

特級胎牛血清FBS  16000-044        USA  500ML      5800

優(yōu)等胎牛血清FBS  26140-079        USA  500ML      3600

優(yōu)等胎牛血清FBS  26140-079        USA  500ML      3600

熱滅活胎牛血清FBS heat inactivated   10082-147        USA  500ML      5600

熱滅活胎牛血清FBS heat inactivated   10100-147        AUSTRALIA       500ML      14239

熱滅活胎牛血清FBS heat inactivated   10100-147        AUSTRALIA       500ML      14239

超低IgG胎牛血清Ultra-low IgG FBS    16250-078        USA  500ML      6000

透析胎牛血清Dialyzed FBS   264000-044      USA  500ML      6800

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清Charcoal Stripped FBS   12676-029        USA  500Ml       6800

新生牛血清New born calf serum          16010159         New Zealand   500ML      1035

馬血清Horse Serum       16050-122        New Zealand   500ML      909

熱滅活馬血清Heat-Inactivated Horse Serum       26050-088      New Zealand   500Ml       1069

胎牛血清FBS  Sv30087.01      SOUTH AMERICA     100ML      800

胎牛血清FBS  Sv30087.02      SOUTH AMERICA     500ML      1800

優(yōu)等胎牛血清FBS  SH30084.03     AUSTRALIA       500ML      5800

優(yōu)等胎牛血清FBS  SH30084.03     AUSTRALIA       500ML      5800

優(yōu)等胎牛血清FBS  SH30084.03     AUSTRALIA       500ML      5800

特級胎牛血清FBS  SH30396.03     Canada    500ML      3900

特級胎牛血清FBS  SH30396.03     Canada    500ML      3900

特級胎牛血清FBS  SH30070.03     USA  500ML      3900

特級胎牛血清FBS  SH30070.03     USA  500ML      3900

特級胎牛血清FBS  SH30070.03E   USA  500ML      5600

特級胎牛血清FBS  SH30070.03E   USA  500ML      5600

標準胎牛血清FBS  SH30370.03     AUSTRALIA       500ML      2800

標準胎牛血清FBS  SH30370.03     AUSTRALIA       500ML      2800

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清Charcoal Stripped FBS   SH30068.03     USA  500ML      6000

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活，Charcoal Stripped FBS         SH30068.03HI USA  500ML      6000

新生牛血清New born calf serum          SH30406.01     New Zealand   500ML      1300

馬血清Horse Serum       SH30074.03     USA  500ML      980

十、其它品牌 –常賣貨號：

產(chǎn)品名稱         貨號         來源         規(guī)格         品牌

胎牛血清FBS  A15-101   EU    500ML      PAA

胎牛血清FBS  A15-151   EU    500ML      PAA

胎牛血清FBS  04-001-1ACS  SOUTH AMERICA     500ML      BI

胎牛血清FBS  F2442     USA  500ML      SIGMA