小鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)科研elisa試劑盒上海潤裕生物科技有限公司提供免費(fèi)代測，從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)分析等全實(shí)驗(yàn)過程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。咨詢！

規(guī)格：96T/48T

性狀：液體

存儲(chǔ)：4℃保存6個(gè)月

運(yùn)輸方式：快遞發(fā)貨

小鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)科研elisa試劑盒組成：

（1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（4）酶的底物；

（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），elisa試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；

（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）

小鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)科研elisa試劑盒用途：科研與實(shí)驗(yàn)試劑，不得用于臨床診斷。

檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。

標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

儲(chǔ)存方式

標(biāo)本的采集與保存：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。                                                         

◇液體類標(biāo)本：                                

    標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。                                 

◇血清：        

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。        

◇血漿：        

　　  應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。             

◇尿液、胸腹水、腦脊液：        

  　　用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。        

◇細(xì)胞培養(yǎng)上清：        

 　　檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。        

◇組織標(biāo)本：                

  　　切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。                

4. 細(xì)胞裂解液：

1）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；

2）將收集到的細(xì)胞用冷 PBS 洗 3 次；

3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：

i 超聲破碎：取適量 PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。

ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20℃ 以下冰凍，室溫融解，反復(fù) 3 次，使細(xì)胞溶脹破碎。

4）將標(biāo)本于 2-8℃ 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃ 或-80℃ 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1. 以上標(biāo)本均需密封保存，4℃ 保存應(yīng)小于 1 周，-20℃ 不應(yīng)超過 1 個(gè)月，-80℃ 不應(yīng)超過 2 個(gè)月。

2. 標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

3. 標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

試劑準(zhǔn)備

1.使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫 （18-25℃），試劑不能直接在 37℃ 溶解。

2.標(biāo)準(zhǔn)品 （凍干品）：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1 mL，蓋好后室溫靜置大約 10 分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為 1000pg/mL。準(zhǔn)備 7 個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的 EP 管，每個(gè) EP 管中加入 500μL 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成 1000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL，31.2pg/mL，15.6pg/mL，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 （0pg/mL） 直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.檢測溶液 A 及檢測溶液 B：Detection A 及 Detection B 在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。臨用前分別以檢測稀釋液 A 或 B1:100 稀釋 （如：10μL 檢測溶液 A/990μL 檢測稀釋液 A），充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制 （100μL/孔），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2 mL。

4.濃洗滌液：用 580 mL 蒸餾水或去離子水將 20 mL 濃洗滌液稀釋至 600 mL，進(jìn)行 30 倍稀釋。

5.底物溶液：請用滅菌的移液器吸頭吸取所需體積的 TMB 至另一干凈容器中使用，容器中剩余的底物應(yīng)予丟棄，不要倒回 TMB 瓶中。

小鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)科研elisa試劑盒注意：

1、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋不能直接在板中進(jìn)行。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品請于臨用前 15 分鐘內(nèi)配制。該標(biāo)準(zhǔn)品只能使用一次。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液 A 工作液、檢測溶液 B 工作液請使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆?；靹驎r(shí)要輕輕充分混勻，避免起泡。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確請使用微量吸管，并校準(zhǔn)微量加液器。請依據(jù)所需的量精確配制，盡量不要微量配制 （如吸取檢測溶液 A 時(shí)，一次不要小于 10μL），以避免造成濃度誤差。

4、 請勿重復(fù)使用已經(jīng)稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液 A 工作液和檢測溶液 B 工作液。

5、 濃洗滌液中如有結(jié)晶析出，請先溫育至室溫，輕輕混勻，至到結(jié)晶*溶解再進(jìn)行配制。

6、 試劑盒中部分試劑為儲(chǔ)存液，客戶需配置成工作液后使用，在配置過程中如因純凈水質(zhì)量差或水質(zhì)污染，以及實(shí)驗(yàn)中所用耗材潔凈度差，可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，甚至*錯(cuò)誤，請使用雙蒸水。

小鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)科研elisa試劑盒訂購說明

1.本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。

2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。

4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素 較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

7.建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過長可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。