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新西蘭TCB胎牛血清進(jìn)口報關(guān)怎么操作？

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1，不需要任何資質(zhì)，個人也可以大量進(jìn)口新西蘭TCB胎牛血清；

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　　然而，為防止國外疾病入侵，保障我國生物學(xué)安全，我國對很多國家血源的胎牛血清執(zhí)行禁止進(jìn)口的政策。從而導(dǎo)致了進(jìn)口血清*的局面，大家所熟知的GIBCO胎牛血清，貨號為16000-044，其價格曾經(jīng)漲到8000元的天價，還供不應(yīng)求。因此如何想辦法進(jìn)口Gibco胎牛血清是很多貿(mào)易商面臨的首大難題。

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　　為滿足廣大進(jìn)口胎牛血清客戶的需求，上海青旗生物打造了一條專業(yè)可靠的胎牛血清進(jìn)口渠道。

TCB牛血清使用方法

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的Bovogen胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實驗的結(jié)果，我們在實驗中使用10%的Bovogen澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的Bovogen FBS或者20%的Bovogen胎牛血清，要根據(jù)具體 細(xì)胞選擇合適的Bovogen胎牛血清濃度。

TCB胎牛血清FBS保存方法

1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾血清。

3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體 參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑 點不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。

TCB胎牛血清(Bovogen血清)使用中遇到的常見問題總結(jié)

一、TCB血清滅活問題。

1、問：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實驗了。

2、問：TCB胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎？

答：進(jìn)口的一般都已滅活，國產(chǎn)的不一定，還是滅活一下再用較安全。

4、問：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因為血清中可能有些補體和抗體，是不是會影 響轉(zhuǎn)染？我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結(jié)合，影響轉(zhuǎn)染，正確嗎？細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞， 病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾，一般是2-6小時，根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補體滅活 ！這要根據(jù)實際情況而定，如果沒有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個小時。

四、FBS可否代替人AB型血清？

問：我現(xiàn)在在做人的外周血b淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)，文獻(xiàn)上要求用人的AB型血清，但是我覺得很多代理商都沒有 。我想FBS代替，但不知道可否，我先是擔(dān)心免疫排斥之類，但是我查了些資料后，應(yīng)該不會(我覺得)。但是我又不 能夠TRY。因為細(xì)胞因子確實太貴了，所以咨詢一下。謝謝！

答：你照文獻(xiàn)的做。除非你系列實驗證明你用代用品的結(jié)果與文獻(xiàn)的相同(你還是要用到文獻(xiàn)的試劑) 。細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素很多，特別是培養(yǎng)基的成分。

五、血清的制備方法問題。

1、問：我的實驗需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細(xì)胞，有沒有人知道用于培養(yǎng)細(xì)胞的血清需要怎樣的制備 過程？

答：自己制備血清當(dāng)心污染啊。如果無菌條件好的話，用靜置析出方法就行。

2、問：一般我們用得胎牛血清用前還要滅活，我想用大鼠的血，不知道要不要滅活？

答：你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜，離心，取上清，在無菌過濾，也可滅活，然后分裝凍存，用 時再配。

3、問：如果滅活會不會對血清中的一些因子有損傷？

答：加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺， 激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。滅活 一般不會對血清中的一些因子損傷的。

六、心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時血清的使用問題。

1、問：在進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時，需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用，我現(xiàn)在使用的是含血清 10%的培養(yǎng)液，但近日看北醫(yī)一個細(xì)胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn)，有用1%血清培養(yǎng)液進(jìn)行中止消化的，想問一下，1%的是否可 以，效果是否有保證？這樣確實能節(jié)省不少血清的。

答：關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

(1)1%的血清*培養(yǎng)基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS* 培養(yǎng)基效果都不太好，開始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現(xiàn)另一個問題，在FBS*培 養(yǎng)基中，成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢細(xì)胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長，純化心肌細(xì)胞。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 。

(3)元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的 DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)。

2、問：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說的在細(xì)胞培養(yǎng)中啊， 難道在消化時終止也需要如此高的濃度嗎，還有，我的BRDU只用到48小時就不用了，因為擔(dān)心其損傷太大，可以持續(xù) 用多久呢？

答：我用10%FBS終止的，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的，沒有用brdu，心肌細(xì)胞還是比 較多和穩(wěn)定的，我第3天就可以用，第2天晚上看就會有搏動。