KK小鼠脂聯(lián)素(ADP)科研elisa試劑盒
- 公司名稱(chēng) 上海潤(rùn)裕生物科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠(chǎng)商性質(zhì) 生產(chǎn)廠(chǎng)家
- 更新時(shí)間 2019/3/26 15:59:47
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KK小鼠脂聯(lián)素(ADP)科研elisa試劑盒上海潤(rùn)裕生物科技有限公司提供免費(fèi)代測(cè),從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)分析等全實(shí)驗(yàn)過(guò)程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。咨詢(xún)!
規(guī)格:96T/48T
性狀:液體
存儲(chǔ):4℃保存6個(gè)月
運(yùn)輸方式:快遞發(fā)貨
KK小鼠脂聯(lián)素(ADP)科研elisa試劑盒組成:
(1)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
(2)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(3)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
(4)酶的底物;
(5)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),elisa試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);
(6)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
KK小鼠脂聯(lián)素(ADP)科研elisa試劑盒用途:科研與實(shí)驗(yàn)試劑,不得用于臨床診斷。
檢測(cè)種屬:人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等種屬。
標(biāo)本:血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
儲(chǔ)存方式
標(biāo)本的采集與保存:收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分激素類(lèi)標(biāo)本需添加抑肽酶。
◇液體類(lèi)標(biāo)本:
標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積=100ul×檢測(cè)種類(lèi)。取材前須向銷(xiāo)售人員索要說(shuō)明書(shū)。
◇血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◇血漿:
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◇尿液、胸腹水、腦脊液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◇細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◇組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
4. 細(xì)胞裂解液:
1)貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化,離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);
2)將收集到的細(xì)胞用冷 PBS 洗 3 次;
3)物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞,再反復(fù)凍融):
i 超聲破碎:取適量 PBS 重懸細(xì)胞,用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂。
ii 反復(fù)凍融:將待破碎的細(xì)胞在-20℃ 以下冰凍,室溫融解,反復(fù) 3 次,使細(xì)胞溶脹破碎。
4)將標(biāo)本于 2-8℃ 1500×g 離心 10 分鐘,收集上清備用。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng) 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃ 或-80℃ 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)本均需密封保存,4℃ 保存應(yīng)小于 1 周,-20℃ 不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè)月,-80℃ 不應(yīng)超過(guò) 2 個(gè)月。
2. 標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。
3. 標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
試劑準(zhǔn)備
1.使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫 (18-25℃),試劑不能直接在 37℃ 溶解。
2.標(biāo)準(zhǔn)品 (凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1 mL,蓋好后室溫靜置大約 10 分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為 1000pg/mL。準(zhǔn)備 7 個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的 EP 管,每個(gè) EP 管中加入 500μL 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成 1000pg/mL,500pg/mL,250pg/mL,125pg/mL,62.5pg/mL,31.2pg/mL,15.6pg/mL,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 (0pg/mL) 直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3.檢測(cè)溶液 A 及檢測(cè)溶液 B:Detection A 及 Detection B 在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。臨用前分別以檢測(cè)稀釋液 A 或 B1:100 稀釋 (如:10μL 檢測(cè)溶液 A/990μL 檢測(cè)稀釋液 A),充分混勻,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制 (100μL/孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2 mL。
4.濃洗滌液:用 580 mL 蒸餾水或去離子水將 20 mL 濃洗滌液稀釋至 600 mL,進(jìn)行 30 倍稀釋。
5.底物溶液:請(qǐng)用滅菌的移液器吸頭吸取所需體積的 TMB 至另一干凈容器中使用,容器中剩余的底物應(yīng)予丟棄,不要倒回 TMB 瓶中。
KK小鼠脂聯(lián)素(ADP)科研elisa試劑盒注意:
1、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋不能直接在板中進(jìn)行。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品請(qǐng)于臨用前 15 分鐘內(nèi)配制。該標(biāo)準(zhǔn)品只能使用一次。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液 A 工作液、檢測(cè)溶液 B 工作液請(qǐng)使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆?;靹驎r(shí)要輕輕充分混勻,避免起泡。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確請(qǐng)使用微量吸管,并校準(zhǔn)微量加液器。請(qǐng)依據(jù)所需的量精確配制,盡量不要微量配制 (如吸取檢測(cè)溶液 A 時(shí),一次不要小于 10μL),以避免造成濃度誤差。
4、 請(qǐng)勿重復(fù)使用已經(jīng)稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液 A 工作液和檢測(cè)溶液 B 工作液。
5、 濃洗滌液中如有結(jié)晶析出,請(qǐng)先溫育至室溫,輕輕混勻,至到結(jié)晶*溶解再進(jìn)行配制。
6、 試劑盒中部分試劑為儲(chǔ)存液,客戶(hù)需配置成工作液后使用,在配置過(guò)程中如因純凈水質(zhì)量差或水質(zhì)污染,以及實(shí)驗(yàn)中所用耗材潔凈度差,可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,甚至*錯(cuò)誤,請(qǐng)使用雙蒸水。
KK小鼠脂聯(lián)素(ADP)科研elisa試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明
1.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過(guò)高,應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋?zhuān)瓜♂尯蟮臉?biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
3.若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本。
4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類(lèi)樣本干擾因素 較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。
7.建議使用新鮮樣本,保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。