SF17A昆蟲細(xì)胞無血清培養(yǎng)基*

品名：SF17A昆蟲細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

貨號：SF10105-2

規(guī)格：1L

價(jià)格：270元

產(chǎn)品介紹：

SF17A是一種適于昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的無血清無蛋白培養(yǎng)基，含有Pluronic F-68、谷氨酰胺、碳酸氫鈉。針對Sf9 、Sf21和High-Five 昆蟲細(xì)胞系的無血清培養(yǎng)而開發(fā)和優(yōu)化，適于通過昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)外源蛋白，使用該培養(yǎng)基可獲得高滴度野生型AcNPV。細(xì)胞可以從無血清或者添加血清的培養(yǎng)基中直接轉(zhuǎn)移到SF17A中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，而無需經(jīng)過適應(yīng)。該培養(yǎng)基可以支持Sf9、Sf21和High-Five 細(xì)胞貼壁或者懸浮生長。Sf9 、Sf21和High-Five 細(xì)胞在SF17A培養(yǎng)基中通?？梢赃_(dá)到1×10 7 cells/ml 的細(xì)胞密度，細(xì)胞活性大于95%，傳代超過20 次而細(xì)胞活性不降低。

細(xì)胞復(fù)蘇：

1.迅速將凍存的細(xì)胞放入37 度水浴中（<1min）。

2.將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)容器中，用預(yù)熱過的培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至0.5～0.8×106 cells/ml。

3.將細(xì)胞放入生化培養(yǎng)箱（無濕度、二氧化碳控制）中的搖床上，27±0.5°C ，90～120 rpm。

4.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到2×106 cells/ml 以上時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。建議在蛋白或者病毒制備前細(xì)胞應(yīng)至少傳代三次以上。

細(xì)胞懸浮培養(yǎng)傳代

昆蟲細(xì)胞對剪切力非常敏感，必須保證攪拌培養(yǎng)過程中槳葉不能與容器壁或者容器底部接觸。

1.使用自動(dòng)或者半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，或者手動(dòng)計(jì)數(shù)的方法測定細(xì)胞密度。

2.向無菌容器中加入預(yù)熱的培養(yǎng)基，將細(xì)胞按照0.5～0.8×106 cells/ml 的密度接種其中（125ml 的搖瓶可以接種20～30 ml，100 ml 的轉(zhuǎn)瓶（spinner bottle）可以接種50～75 ml）。

3.培養(yǎng)箱溫度27±0.5°C ，不需要濕度和二氧化碳控制。

4.搖床轉(zhuǎn)速90-120 rpm，轉(zhuǎn)瓶攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)定為60～95 rpm（因儀器參數(shù)不同，建議在培養(yǎng)時(shí)對轉(zhuǎn)速進(jìn)行優(yōu)

化）。

5.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到2×106 cells/ml 以上時(shí)，可以進(jìn)行傳代。

注意：如果觀察到培養(yǎng)物中有細(xì)胞碎片，建議將細(xì)胞懸液100 g 離心5～10 min，棄上清，用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，這樣可減少細(xì)胞碎片和代謝副產(chǎn)物的積累。

注意：建議控制細(xì)胞培養(yǎng)代次，每隔一段時(shí)間需要重新復(fù)蘇一支低代次的細(xì)胞

細(xì)胞貼壁培養(yǎng)傳代

1.當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80~90%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)上清去除。

2.添加4 mL 預(yù)熱培養(yǎng)基（25 cm2），反復(fù)吹打制備細(xì)胞懸液。

3.觀察細(xì)胞是否全部脫落。

4.如果部分細(xì)胞結(jié)團(tuán)，將全部細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中，靜止1~2 min，細(xì)胞團(tuán)會沉降到離心管的底部。用槍頭輕輕碾壓細(xì)胞團(tuán)促使細(xì)胞分散。如果細(xì)胞團(tuán)比較大，可以重以上步驟。用槍頭吹打過重會造成細(xì)胞活性降低。

5.計(jì)數(shù)細(xì)胞密度。

6.按照2~8×104 cells/cm2 的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)基按照5 mL/cm2 的量進(jìn)行添加。

7.置于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，27±0.5°C ，不需要濕度和二氧化碳控制。

8.培養(yǎng)三天后將培養(yǎng)上清去除，靠近方瓶一側(cè)將新鮮培養(yǎng)基緩慢添加到方瓶中。

注意：Sf9 細(xì)胞為非貼壁依賴型細(xì)胞，可以在貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)兩種培養(yǎng)模式之間進(jìn)行多次轉(zhuǎn)換，而且細(xì)胞活性、形態(tài)和生長速率基本無區(qū)別。

將細(xì)胞適應(yīng)至SF17A培養(yǎng)基中，在適應(yīng)過程中，細(xì)胞活性非常重要，必須不低于90%，并處于對數(shù)生長中期。

直接懸浮適應(yīng)

單層培養(yǎng)的細(xì)胞，只需要在傳代時(shí)直接將培養(yǎng)基更換為SF17A。

按照以下步驟將懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至該培養(yǎng)基中：

1.將細(xì)胞懸液100×g 離心5～10 min，將上清去除。

2.使用預(yù)熱過的SF17A培養(yǎng)基將細(xì)細(xì)胞重懸，細(xì)胞密度不低于8×105 cells/mL，轉(zhuǎn)移至合適的容器中進(jìn)行

培養(yǎng)。

3.置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，監(jiān)測細(xì)胞生長情況。

逐步適應(yīng)

按照貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)傳代方法和以下方法進(jìn)行逐步適應(yīng)。

1.在適應(yīng)過程中細(xì)胞密度不低于0.8×106 cells/mL。

2.在傳代培養(yǎng)過程中逐步增加SF17A培養(yǎng)基的比例，SF17A培養(yǎng)基與初始培養(yǎng)基的比例逐漸升高（25:75，

50:50，75:25，全部的SF17A）。在某個(gè)比例培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)有可能要多次傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1.準(zhǔn)備處于對數(shù)生長中期的細(xì)胞，細(xì)胞活性>90%。

2.確定需要的細(xì)胞數(shù)量和凍存液體積，凍存液中細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到0.5～1.0 × 107 cells/ml。

3.凍存液由82.5%SF17A，7.5% DMSO，10% 胎牛血清組成（血清也可以不添加）。凍存液4°C 保存。

4.將培養(yǎng)物100 g 離心6 min，去除上清，使用凍存液重懸細(xì)胞。

5.根據(jù)培養(yǎng)規(guī)模將細(xì)胞分裝于合適的凍存管中，如4.5 ml～5.0 ml/支。

6.細(xì)胞可以在液氮中長期穩(wěn)定保存，但不確定長保存期限。

SF17A昆蟲細(xì)胞無血清培養(yǎng)基*貨號及規(guī)格：

液體：

SF17A培養(yǎng)基，1L 液體，SF10105-2__