凝膠遷移或電泳遷移率EMSA實(shí)驗(yàn)流程及交付標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)意義

EMSA是轉(zhuǎn)錄因子研究的經(jīng)典方法。今年來(lái)基因分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的趨勢(shì)之一是從基因結(jié)構(gòu)和功能分析轉(zhuǎn)向基因順式作用元件和反式作用因子(轉(zhuǎn)錄因子)及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制上，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究是表觀遺傳學(xué)和功能基因組學(xué)的熱點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)原理及流程

凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)是-種檢測(cè)DNA序列和蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)。將純化的蛋白與細(xì)胞粗提液以及同位素標(biāo)記的DNA或者RNA探針- -同孵育，然后通過(guò)非變性的聚丙烯凝膠電泳分離核酸蛋白質(zhì)復(fù)合物以及未結(jié)合的探針，核酸蛋白質(zhì)復(fù)合物(DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物或RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物)比未結(jié)合的探針遷移速度慢，從而檢測(cè)DNARNA序列與蛋白質(zhì)的相互作用。

結(jié)果展示[1,2]

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 4-7周

2.交付標(biāo)準(zhǔn): X光片、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、儀器)

需確認(rèn)的信息

1.目的基因與蛋白信息

2.樣本種屬及類型

3.是否提供抗體

參考文獻(xiàn)

[1]MillerD E , PatelZH , LuX, et al. Screening for Functional Non-coding Genetic Variants Using ElectrophoreticMobility Shift Assay (EMSA) and DNA- afinity Precipitation Assay (DAPA)J]. Journal of Visualized Experiments Jove,

2016, 2016(114).

[2] Pares-Matos EL. Electrophoretic Mobility-Shift and Super-Shift Assays for Studies and Characterization of Protein-DNA Complexes[M]/ Gene Regulation. Humana Press, 2013.

[3] Bak G , Han K, Kim K, et al. Electrophoretic mobility shift assay of RNA-RNA complexes [J]. Methods in MolecularBiology, 2015, 1240:153.

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