全新化學(xué)成分確定CHO細(xì)胞培養(yǎng)基惠誠現(xiàn)貨AltairCHO® Medium

AltairCHO™是完(空格)全化學(xué)成分確定（Chemically-defined）基礎(chǔ)培養(yǎng)基，不含水解物、蛋白、生長因子及任何動物來源的成分，適合于不同亞型中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO-K1、CHO DG44 和 CHO-S 細(xì)胞）的高密度懸浮培養(yǎng)，可實現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá)。AltairCHO?基礎(chǔ)培養(yǎng)基與全新一代高性能補料AltairCHO™Feed或 VegaCHO™ Feed 聯(lián)用，可支持細(xì)胞高密度生長及活率維持，實現(xiàn)更高水平的蛋白/抗體表達(dá)和質(zhì)量。

應(yīng)用范圍 

AltairCHO™ 可應(yīng)用于 CHO 細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代以及高密度流加培養(yǎng)。該基礎(chǔ)培養(yǎng)基適用于科研和基于細(xì)胞培養(yǎng)的大規(guī)模生物制品的生產(chǎn)，但不可直接用于人體或作為藥物使用。

儲存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 

運輸：常溫（液體）、冷藏（干粉）

液體培養(yǎng)基配制方法 

AltairCHO? 培養(yǎng)基不含谷氨(空格)酰胺和碳酸(空格)氫鈉。

1. 取最終配制體積 90%的超純水，水溫 25~35°C（注：一次性配制體積不低于 1L）；

2. 稱量 19.65 g/L 干粉培養(yǎng)基，緩慢加入水中并攪拌，待粉末完(空格)全分散后，再繼續(xù)攪拌10 分鐘，容器邊緣殘留干粉應(yīng)將其全部沖入； 

3. 稱量 2.22g/L 碳酸(空格)氫鈉，加入水中并攪拌； 

4. 緩慢加入 5N NaOH 調(diào)節(jié) pH 到 8.3~8.5，攪拌 20~30 分鐘，此時應(yīng)完(空格)全溶解； 

5. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調(diào)回至 7.0； 

6. 加超純水定容到最終配液體積，繼續(xù)攪拌 5 分鐘，測 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 將pH 調(diào)至7.0；

7. 取樣測滲透壓，加入 NaCl 調(diào)節(jié)滲透壓至 285±10 mOsm/kg（滲透壓計算公式：NaCl 添加量（g）=配液體積（L）×（285-檢測值）/ 31.5）；

8. 繼續(xù)攪拌 10 分鐘，無菌過濾到合適容器

培養(yǎng)條件 

溫度 37℃，濕度 80%，5~8% CO2 

搖床設(shè)置：轉(zhuǎn)速 110~150 rpm（振幅 50 mm）

細(xì)胞復(fù)蘇 

1. 在 37℃水浴中快速（＜2 min）融化冷凍的細(xì)胞； 

2. 將冷凍管中的細(xì)胞液全部轉(zhuǎn)移到 125 mL 含有 30mL 預(yù)溫過的 AltairCHO™ 培養(yǎng)基的搖瓶中；

3. 放入 37℃，5~8% CO2，轉(zhuǎn)速 110~130 rpm（振幅 50 mm），濕度 80%的搖床中培養(yǎng)；

4. 細(xì)胞至少傳代 2 次，待其完(空格)全復(fù)蘇，細(xì)胞倍增時間（Population Doubling Time，PDT）穩(wěn)定后，可按計劃進(jìn)行后續(xù)操作。

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細(xì)胞傳代 

1. 將 AltairCHOTM培養(yǎng)基放入 37℃條件下預(yù)熱 20-30 min； 

2. 取細(xì)胞密度≥1×106 cells/ml、活率≥90%、處于對數(shù)生長期中期的細(xì)胞進(jìn)行傳代；

3. 按接種密度為 0.5×106 ~ 1.0×106 cells/L 的最終傳代體積，計算所需種子液量；

4. 無菌轉(zhuǎn)移所需量的種子液，添加至含所需體積的已預(yù)熱的 AltairCHOTM培養(yǎng)基的搖瓶中；

5. 將搖瓶放入溫度 37℃，濕度 80%，轉(zhuǎn)速 110~150 rpm（振幅 50 mm），5%~8% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)搖床中進(jìn)行培養(yǎng)； 6. 每 2~3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進(jìn)行傳代培養(yǎng)。