DNA流式細(xì)胞儀試劑ECT0011.0ECT001

DNA流式細(xì)胞儀試劑ECT0011.0ECT001

細(xì)胞活力染色：一步，即可使用。使用碘化丙啶，可通過膜滲透快速殺死死細(xì)胞。

用于流式細(xì)胞術(shù)的DNA標(biāo)準(zhǔn)：基于鱒魚紅細(xì)胞（TRBC）的DNA標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)無毒且針對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。

核隔離培養(yǎng)基（NIM）：從細(xì)胞，組織，凍融的組織或脫脂的/酶分離的組織中分離完整的細(xì)胞核。

技術(shù)指標(biāo)

文獻(xiàn)資料

建議的協(xié)議

細(xì)胞生存力染色劑：將100uL細(xì)胞生存力染色劑與100uL細(xì)胞以1x10 ^ 5-1x10 ^ 6細(xì)胞/ mL的比例混合）

用于流式細(xì)胞術(shù)的DNA標(biāo)準(zhǔn)液：以1-2x10 ^ 6細(xì)胞/ mL的濃度將50uL的DNA標(biāo)準(zhǔn)液添加到1mL的細(xì)胞中。離心成沉淀并重懸于僅NIM（定制染色），NIM-DAPI或NIM-PI中。或者，可以將部分DNA標(biāo)準(zhǔn)品和細(xì)胞直接添加到1 mL NIM溶液中，并進(jìn)行染色，無需離心。分析前，應(yīng)將懸浮液在冰或室溫下放置2-3分鐘。

核分離培養(yǎng)基（NIM）：與DNA標(biāo)準(zhǔn)品（參見上文）一起，將離心沉淀重懸于100uL僅NIM（用于定制染色），NIM-DAPI或NIM-PI中?；蛘撸梢詫⒉糠諨NA標(biāo)準(zhǔn)品和細(xì)胞直接添加到1 mL NIM溶液中，并進(jìn)行染色，無需離心。分析前，應(yīng)將懸浮液在冰或室溫下放置2-3分鐘。

數(shù)據(jù)

具有TRBC DNA標(biāo)準(zhǔn)和核隔離介質(zhì)（NIM-DAPI）的扁桃體

將DNA標(biāo)準(zhǔn)品與NIM-DAPI混合，并通過37µm過濾器過濾。用于建立流式細(xì)胞儀的DNA標(biāo)準(zhǔn)在CV = 1-2％的范圍內(nèi)運(yùn)行。其次，在樣品運(yùn)行期間，DNA標(biāo)準(zhǔn)品在通道50（約5.0 pg /核）處達(dá)到峰值。通過使用人類扁桃體確定CV = 2-3％，G0扁桃體核的相對(duì)DNA值為7.4 pg /核，使用通道50中的位置來確保對(duì)位酶起作用。對(duì)照石蠟化的人扁桃體組織也進(jìn)行了脫蠟和酶解，以確保PARA試劑功能正常。每次確定良性和癌性組織的DNA直方圖測(cè)量值時(shí)，所有扁桃體對(duì)照均為CV = 2-3％。另外，所有DNA標(biāo)準(zhǔn)樣品的CV = 1-2％。（A）典型的DNA標(biāo)準(zhǔn)鱒魚紅細(xì)胞（TRBC）值。CV ＝ 1.42±0.19SD，n ＝ 66。（B）具有DNA標(biāo)準(zhǔn)的人類扁桃體。22個(gè)樣品的數(shù)據(jù)得出的平均變異系數(shù)為2.18±0.46 SD，平均DNA指數(shù)為1.42±0.03 SD，平均S相分?jǐn)?shù)為4.37±1.37 SD。

改編自： Thornthwaite，JT等。J.實(shí)體瘤3：12-23（2013）。

提供者

來自西田納西州癌癥研究所