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探針合成實(shí)驗(yàn)步驟

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1生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、

2.ELISA試劑盒、分離液、分離液試劑盒

3.細(xì)胞:*細(xì)胞、國(guó)產(chǎn)腫瘤細(xì)胞、國(guó)產(chǎn)正常細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞

4.食品安全檢測(cè)試劑、動(dòng)物疫病類檢測(cè)產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)試劑

5.耗材:常用實(shí)驗(yàn)耗材、移液器


各種實(shí)驗(yàn)代做:WB代做,免疫組化,PCR代做,細(xì)胞檢測(cè),食品安全檢測(cè)試劑,獸藥殘留檢測(cè)試劑,動(dòng)物疫病類檢測(cè),銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,ELISA試劑盒,細(xì)胞,血清,等等

產(chǎn)地類別 國(guó)產(chǎn) 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

探針合成實(shí)驗(yàn)步驟



探針是- -小段單鏈DNA或者RNA*片段(大約是20到500 bp), 用于檢測(cè)與其互補(bǔ)的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈,隨后用放射性同位素(通常用磷-32)、螢光染料或者酶 (如辣根過氧化物酶)標(biāo)記成為探針。


實(shí)驗(yàn)材料

基因


試劑、試

劑盒


轉(zhuǎn)錄緩沖液DTT RNA酶抑制劑CTP ATP S-UTP乙酸銨乙醇


儀器、耗


水溶鍋、離心機(jī)、培養(yǎng)箱、烘箱











實(shí)驗(yàn)步驟

1.在一個(gè)含SP6. T3或T7啟動(dòng)子的載體中,插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質(zhì)粒呈線

性。DNAL以酚/氨0仿抽提, 乙醇沉淀,70%乙醇洗后晾干。以無菌水重溶沉淀至1 ug/ul。

2.室溫配置如下反應(yīng)混合液(總體積20μl) :

(1) 4.0 ul 5x轉(zhuǎn)錄緩)沖液

(2) 0.2 ul 1 mol/ DTT

(3) 60 U RNA酶抑制劑

(4) 1.0 ul三種10 mmol/l NTP中的每-種

(5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA

(6) 10.0μ ζ[35s] UTP

(7) 16 U SP6或T7 RNA聚合酶

(8) 37*C溫育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C溫育40 min。

3.在反應(yīng)混合液中加入: 60 U RNA酶抑制劑,20 μl 10 mg/ml的載體RNA和1.0μl酶1,于37°C溫育10 min以除去摸板。

4.往反應(yīng)混合液加入以下液體: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 無菌水和10 μI3 mol/l乙酸鈉,取出1 ul測(cè)定其cpm/ul值。

5.加36.4μ7.5 molM的乙酸銨于反應(yīng)混合液(終濃度2 mol/)加50~100 ug tRNA載體和272ul冷無水乙醇,置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀,晾干,需要的話可重復(fù)此步。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。


6.確定其cpm/μl值, 并計(jì)算摻入百分比,核糖核酸探針應(yīng)于2~3天內(nèi)使用。

(70%到90%的標(biāo)記摻入,結(jié)果可得70~90 ng標(biāo)記的RNA)





收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:

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實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 




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