人丙酮酸脫氫酶（PDHE1）試劑盒，是科研領(lǐng)域用于檢測人樣本中丙酮酸脫氫酶 E1 含量的常用工具，在細胞代謝、疾病機制研究等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其核心檢測原理為雙抗體夾心法。試劑盒內(nèi)的微孔板已預(yù)先包被有人丙酮酸脫氫酶 E1 的特異性抗體。檢測時，先將樣本（如血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等 ）與標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中，樣本里的 PDHE1 會與包被抗體特異性結(jié)合。接著加入 HRP 標(biāo)記的 PDHE1 抗體，它會與已結(jié)合在包被抗體上的 PDHE1 進一步結(jié)合，形成穩(wěn)固的 “包被抗體 - PDHE1 - 酶標(biāo)抗體” 夾心結(jié)構(gòu)。經(jīng)過充分溫育和多次嚴(yán)格洗滌，去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入底物 TMB。在 HRP 酶的催化下，TMB 轉(zhuǎn)化為藍色，并在酸作用下變?yōu)樽罱K的黃色，顏色深淺與樣本中的 PDHE1 含量成正比?？蒲腥藛T借助酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定吸光度（OD 值），再通過標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)計算出樣本中 PDHE1 的濃度。

該試劑盒組成豐富，包含酶標(biāo)包被板，這是反應(yīng)發(fā)生的關(guān)鍵場所；不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，為定量檢測提供參照；酶標(biāo)試劑，即 HRP 標(biāo)記的抗體，催化顯色反應(yīng)；樣品稀釋液，用于處理樣本，使其符合檢測要求；顯色劑 A 液與 B 液，二者混合后在酶作用下發(fā)生顯色；終止液用于停止顯色反應(yīng)；還有濃縮洗滌液，用于洗滌酶標(biāo)板，去除未結(jié)合雜質(zhì)，保證結(jié)果準(zhǔn)確。

在樣本處理上，血清需室溫下自然凝固 10 - 20 分鐘，2000 - 3000 轉(zhuǎn) / 分離心 20 分鐘左右，取上清，若保存中出現(xiàn)沉淀需再次離心；血漿應(yīng)根據(jù)要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉抗凝，混合 10 - 20 分鐘后同樣離心取上清；尿液用無菌管收集后離心，收集上清，胸腹水、腦脊液處理方式類似；細胞培養(yǎng)上清，檢測分泌性成分時，無菌管收集后離心取上清，檢測細胞內(nèi)成分，需先用 PBS 稀釋細胞懸液，反復(fù)凍融使細胞破裂，再離心取上清；組織標(biāo)本切割稱重后，加入適量 PBS，液氮速凍備用，融化后保持 2 - 8℃，勻漿后離心取上清，分裝保存。標(biāo)本采集后應(yīng)盡早提取并盡快實驗，若無法及時實驗，可在 - 20℃保存，但要避免反復(fù)凍融，且不能檢測含 NaN3 的樣品。

操作試劑盒時，首先要對標(biāo)準(zhǔn)品進行稀釋與加樣，在酶標(biāo)包被板上設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔，按特定步驟稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，使其濃度形成梯度。加樣時，設(shè)置空白孔與待測樣品孔，先在待測樣品孔加樣品稀釋液，再加待測樣品。之后進行溫育，用封板膜封板后在 37℃溫育 30 分鐘。接著配液，將濃縮洗滌液按比例用蒸餾水稀釋備用。然后進行多次洗滌，小心揭掉封板膜，棄液甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù) 5 次并拍干。洗滌后加酶標(biāo)試劑，空白孔除外，再次溫育。隨后再次洗滌，接著依次加入顯色劑 A 液與 B 液，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘，最后加終止液終止反應(yīng)，在加終止液后 15 分鐘內(nèi)，以空白空調(diào)零，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔 OD 值。

試劑盒需保存在 2 - 8℃環(huán)境，有效期通常為 6 個月。使用過程中有諸多注意事項，從冷藏環(huán)境取出后應(yīng)在室溫平衡 15 - 30 分鐘再用，酶標(biāo)包被板開封未用完需密封保存；濃洗滌液若有結(jié)晶析出，可水浴加溫助溶；加樣要使用加樣器并經(jīng)常校準(zhǔn)，一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi)，樣本多推薦用排槍加樣；每次檢測要同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線并做復(fù)孔，樣本中待測物質(zhì)含量過高需先稀釋再測定；封板膜只能一次性使用，底物需避光保存；嚴(yán)格按說明書操作，結(jié)果判定以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)；所有樣品、洗滌液和廢棄物都要按傳染物處理；不同批號組分不可混用 。憑借高靈敏度、特異性強、重復(fù)性好等優(yōu)勢，人丙酮酸脫氫酶（PDHE1）試劑盒為相關(guān)科研工作提供了可靠的數(shù)據(jù)支持 。