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THP-1細胞siRNA轉染

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THP-1細胞siRNA轉染

一、轉染材料準備

1. 轉染試劑用量10ul

2. siRNA濃度:20um/L

3. 細胞密度:1*106-1*105

4. 轉染用培養(yǎng)板:6孔板

5. 轉染試劑:Advanced DNA RNA轉染試劑;貨號:AD600025

6. 轉染時間:48小時

7. 細胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7180FBS-500低內毒素胎牛血清

8. 細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液
注意:本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。

THP-1細胞   siRNA轉染

操作過程:

1.提前1接種細胞細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉染

2. 核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照比例關系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細胞培養(yǎng)基加入核酸復合物根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

4.細胞換液:轉染24小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉染過程中不用換液。

5.分析結果質粒DNA轉染48-72小時后熒光檢測轉染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉染后9小時熒光檢測轉染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。

 

一、轉染試劑產品介紹

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑,此技術成為新的全球蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產的主要關鍵技術之一。

二、*表現

Zeta Life多肽小分子轉染試劑尺寸大小是傳統脂質體轉染試劑體積的1/10;

本轉染試劑是通過細胞內?和細胞主動吸收進入細胞;

本轉染試劑進入后對細胞膜無物理性損傷,不易出現細胞變形,保持高的細胞活力;

不激活細胞表面或細胞體內marker;

可反映真實的細胞通路蛋白原始數據;

可轉染免疫細胞、懸浮細胞等;

          THP-1細胞siRNA轉染 ,raw267.7細胞轉染,懸浮細胞轉染,免疫細胞轉染



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