Iba1抗體，兔源（免疫組化用）
- 公司名稱 富士膠片和光（廣州）貿(mào)易有限公司
- 品牌 Wako/和光純藥
- 型號
- 產(chǎn)地 日本
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2023/12/21 14:47:54
- 訪問次數(shù) 416
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| 供貨周期 | 一個月以上 |
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Iba1抗體，兔源（免疫組化用）
Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)
Iba1（Ionized calcium-binding adapter molecule 1）是分子量約為17 kDa的鈣結(jié)合蛋白。由于在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，Iba1在小膠質(zhì)細胞中特異性表達1），因此被用作小膠質(zhì)細胞標(biāo)志物。據(jù)報告稱，Iba1在靜息型小膠質(zhì)細胞和活化型小膠質(zhì)細胞中均有表達，但有報告稱在活化型小膠質(zhì)細胞中其表達會有所增加2）。另外，Iba1也會在外周組織的巨噬細胞中表達，被稱為AIF-1（同種異體移植物炎癥因子1，Allograft inflammatory factor-1）。Iba1在細胞內(nèi)與F-肌動蛋白結(jié)合，發(fā)揮著形成肌動蛋白纖維束的作用。這種肌動蛋白纖維束的形成被認(rèn)為是細胞遷移和吞噬過程中觀察細胞膜波動結(jié)構(gòu)形成所必須的3）。
抗Iba1，兔源（免疫組化用）在免疫組織染色中可以對小膠質(zhì)細胞包括突起一并進行染色，因此被世界各地的研究人員作為小膠質(zhì)細胞標(biāo)記抗體的標(biāo)準(zhǔn)來使用。
近年來，小膠質(zhì)細胞因其神經(jīng)營養(yǎng)和保護作用以及通過產(chǎn)生NO、TNF-α和IL-1β引起的神經(jīng)損傷作用備受關(guān)注。
小膠質(zhì)細胞的染色圖像
Anti Iba1，兔源（免疫組化用）
◆特點
● 在免疫組織染色（冰凍切片）中可染色小膠質(zhì)細胞包括其突起※
● 使用濃度為1︰500 - 1︰1,000，少量使用也可染色。
※ 染色程度取決于樣品狀況，無法保證一定能染色成功。
◆抗體信息
抗體種類 | 多克隆抗體 |
抗原 | Iba1的合成肽（C端序列相同） |
免疫動物 | 兔子 |
交叉性 | 人、小鼠、大鼠、其他※ |
濃度 | 0.5-0.7 mg/mL |
應(yīng)用 | 免疫組織染色（冰凍切片）：1︰500-1,000 免疫細胞染色： 1︰500-1,000 |
儲存條件 | -20℃冷凍保存（干冰運輸） |
抗原來源動物 | 大鼠 |
※ 擁有犬4）、貓5）、豬6）、狨猴7）、斑馬魚8）的應(yīng)用實例
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◆應(yīng)用數(shù)據(jù)
免疫組織染色（小鼠）
| 物種：小鼠 部位：小腦 樣品：冰凍切片 抗體濃度：1︰1,000 |
| 物種：小鼠 部位：伏隔核 樣品：超薄切片 抗體濃度：1︰500 <數(shù)據(jù)提供> 東京理科大學(xué)生命生物科學(xué)科 |
| 物種：小鼠 部位：脊髓 樣品：冰凍切片 抗體濃度：1︰500 <數(shù)據(jù)提供> 東京理科大學(xué)生命生物科學(xué)科 |
| 物種：小鼠 部位：視網(wǎng)膜 抗體濃度：1︰1,000 <數(shù)據(jù)提供> Prof. Lieve Moons, |
免疫組織染色（大鼠）
| 物種：大鼠 部位：大腦皮層 樣品：冰凍切片 抗體濃度：1︰1,000 <數(shù)據(jù)提供> 日本國立精神·神經(jīng)醫(yī)療研究中心 佐柳老師、真鍋老師、一戶老師、高坂老師 |
◆Anti Iba1抗體系列
產(chǎn)品詳情 | 產(chǎn)品等級 |
小膠質(zhì)細胞標(biāo)記物抗體——Anti Iba1抗體： | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1, 重組兔源單克隆抗體（6A4）： http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1574.html | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1，兔（免疫細胞化學(xué)用）： http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1085.html | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1，兔（石蠟切片用）： | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1，兔 生-物素結(jié)合： | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1，兔源（結(jié)合488綠色熒光）（Prototype）： https://www.bb-china.net/detailed.html?pid=89174&kw=282-37691 | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1, 兔源, 結(jié)合SPICA Dye™ 568： http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1421.html | 免疫化學(xué)用 |
抗 Iba1，兔源，SPICA Dye™ 594偶聯(lián)： http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1531.html | 免疫化學(xué)用 |
Anti-Iba1、紅色熒光染料（635）結(jié)合： http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/956.html | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1，山羊多克隆抗體： http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1373.html | 免疫化學(xué)用 |
鼠源Iba1抗體，無標(biāo)簽，單克隆抗體（NCNP24）： http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1027.html | 免疫化學(xué)用 |
抗Iba1, 兔源單克隆抗體（NCNP27）： | 免疫化學(xué)用 |
◆Anti Iba1產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 |
| 019-19741 | Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry) 抗Iba1，兔（免疫組化用） | 50 μg | 免疫化學(xué)用 |
相關(guān)資料
◆原代小膠質(zhì)細胞ICC實驗方案示例
將從新生大鼠（出生0~2天）的大腦中制備和培養(yǎng)的原代混合膠質(zhì)細胞按照1.0×105 cell/well接種至4 well-plate、13 φmm蓋玻片（PLL涂層）。
↓
固定：4% formaldehyde-PBS, 15 min
↓
清洗：PBS
↓
通透：0.1% TX-100 PBS, 5 min
↓
封閉：3% BSA-3% normal goat serum-PBS (blocking buffer), >15min
↓
一抗反應(yīng)：抗Iba1抗體（1:1,000）blocking buffer, 1h
↓
清洗
↓
二抗反應(yīng)：Alexa Fluor 488標(biāo)記抗兔IgG抗體/blocking buffer, 1h
↓
封片
↓
在熒光顯微鏡下進行觀察
FAQ
◆關(guān)于抗體
Q1：抗原是什么樣的？
A1：是Iba1的合成肽（C端序列相同）。具體序列未公開。
Q2：50 μg的使用量是多少？
A2：在免疫組織染色中，每張玻片使用200 μL抗體溶液（稀釋度為 1:1,000）的情況下，可使用約500次。
◆關(guān)于實驗方案
Q3：建議使用哪種二抗？
A3：FUJIFILM Wako擁有以下二抗的使用實例，可供參考。
Alexa Fluor® 488-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) （Jackson ImmunoResearch公司, 廠家編號: 111-545-144）
Alexa Fluor® 647-conjugated AffiniPure Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) (Jackson ImmunoResearch公司, 廠家編號: 711-605-152)
◆關(guān)于故障排除
Q4：WB中無法檢測出條帶
A4：本抗體適用于免疫組織染色（冰凍切片）以及免疫細胞染色，如需進行WB，請使用 抗Iba1,兔源（Western Blotting用) （產(chǎn)品編號：016-20001）
Q5：免疫組織染色和免疫細胞染色中小膠質(zhì)細胞無法染色
A5：可能導(dǎo)致此問題的原因有以下幾種，請嘗試對應(yīng)的解決方案。
1. 固定不充分
有報告稱，未灌注固定或固定不充分的樣品染色效果會降低。請在免疫組織染色中使用4%多-聚甲醛（PFA）進行灌注固定后再制備冰凍切片。
2. 抗原變性
請嘗試在以下條件下進行抗原修復(fù)操作
（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min
（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min
3. 樣品變質(zhì)
需要重新制備樣品，切片厚度約為20-50 μm。
4. 抗體量少
請?zhí)岣呖贵w濃度，推薦濃度為1︰500~1,000。
Q6：免疫組織染色和免疫細胞染色的背景過高。
A6：導(dǎo)致此問題的可能原因有以下幾種，請嘗試對應(yīng)的解決方案。
① 封閉不充分
請嘗試延長封閉的孵育時間或更換封閉試劑。建議使用推薦Protocol中記載的1% BSA, 含0.3% TritonX-100的PBS和含1% BSA, 0.3% Tween-20的PBS，或3%二抗宿主的正常血清。
② 一抗的量過多
請降低一抗?jié)舛?，推薦濃度為1︰500~1,000。
③ 二抗的反應(yīng)時間過長
請縮短反應(yīng)時間。推薦反應(yīng)時間為1~2 h，或增加二抗反應(yīng)后的清洗次數(shù)。
④ 樣品變質(zhì)
需要重新制備樣品，切片厚度約為20-50 μm。
⑤ 抗原變性
請嘗試在以下條件下進行抗原修復(fù)操作
（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min
（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min
⑥ 內(nèi)源性的過氧化物酶發(fā)生反應(yīng)（使用HRP或POD作為檢測酶時）
為了滅活內(nèi)源性過氧化物酶，請在阻斷前使用含3%過氧化氫的80%甲醇溶液，并在-20℃條件下處理20 min。
Q7：在免疫組織染色中，除小膠質(zhì)細胞外，神經(jīng)細胞也被染色。
A7：可能導(dǎo)致此問題的原因有以下幾種，請嘗試對應(yīng)的解決方案。
① 抗體的量過多
請降低一抗或二抗的抗體濃度，抗Iba1抗體的推薦濃度為1︰500~1,000。
② 二抗的反應(yīng)時間過長
請縮短反應(yīng)時間。推薦反應(yīng)時間為1~2 h，或增加二抗反應(yīng)后的清洗次數(shù)。
③ 抗原變性
請嘗試在以下條件下進行抗原修復(fù)操作
（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min
（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min
◆關(guān)于應(yīng)用數(shù)據(jù)
Q8：本抗體可以用于流式細胞儀嗎？
A8：FUJIFILM Wako沒有使用實例，但以下論文中使用了本抗體，敬請參考。
Koh, H. S., et al.: Nat. Commun., 6(1),1(2015).
The HIF-1/glial TIM-3 axis controls inflammation-associated brain damage under hypoxia.
參考文獻
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