熒光蛋白具有穩(wěn)定性強(qiáng)、無物種專一性、易于在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)等特點，有利于在食品安全監(jiān)控和環(huán)境微生物研究中進(jìn)行菌株鑒定與追蹤，根據(jù)熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。因此, 已作為標(biāo)記物而廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域。目前, 常見的熒光標(biāo)記有綠色熒光標(biāo)記（GFP），紅色熒光標(biāo)記（RFP）和mCherry，其成功標(biāo)記案例在革蘭氏陽性菌和陰性菌中均有報道。本文主要介紹GFP、RFP和mCherry三種熒光標(biāo)記的案例和運(yùn)用。

綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作為一種理想的活體熒光標(biāo)記分子，越來越多地被用于活細(xì)胞或微生物的定位、結(jié)構(gòu)和動力學(xué)的研究，也可以通過測定GFP的熒光強(qiáng)度對菌株中GFP的表達(dá)量進(jìn)行定量分析^[1]。GFP已經(jīng)在許多細(xì)菌中完成了轉(zhuǎn)化，如：（1）利用GFP追蹤了乳酸乳球菌WH-C1在小鼠腸道內(nèi)的定植情況；（2）利用GFP發(fā)現(xiàn)德氏乳桿菌D17嵌入在黏液層中，局部接近腸道的上皮細(xì)胞；（3）在植物乳桿菌WCFS1中進(jìn)行GFP標(biāo)記，研究WCFS1在腸道內(nèi)的定植與分布。

紅色熒光蛋白 (Red Fluorescent Protein, RFP)相比綠色熒光蛋白 (GFP)其靈敏度更高, 是基于GFP基礎(chǔ)上的一種優(yōu)良穩(wěn)定的熒光蛋白。目前已在不同的菌株中成功進(jìn)行RFP標(biāo)記，如：（1）在根瘤菌中進(jìn)行RFP熒光標(biāo)記，可探究根瘤菌結(jié)瘤固氮能力及根瘤菌與土著菌競爭關(guān)系 ^[2]；（2）構(gòu)建了以紅色熒光蛋白基因 (dsred2) 為標(biāo)記, 以amy為報告基因的表達(dá)載體, 成功實現(xiàn)了融合基因dsred2-amy在干酪乳桿菌中的融合表達(dá)；（3）銅綠假單胞菌中轉(zhuǎn)入RFP標(biāo)記，證實其在含油多孔物質(zhì)中的遷移擴(kuò)散及所受限制^[3]；（4）在幽門26695中構(gòu)建了GFP和RFP熒光標(biāo)記，用于探究幽門的遺傳調(diào)控和信號追蹤^[4]。

mCherry熒光蛋白也叫櫻桃熒光蛋白，是從蘑菇珊瑚（mushroom coral）中分離出來的單體紅色熒光蛋白，相較于其它單體熒光蛋白，其顏色和單體分子的光穩(wěn)定性更強(qiáng)。mCherry熒光標(biāo)記技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和神經(jīng)科學(xué)等多個領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用，用于追蹤蛋白質(zhì)、細(xì)胞器或其他生物大分子在活細(xì)胞中的分布和動態(tài)。近年來, mCherry用于熒光標(biāo)記的研究報道逐漸增多, 相對其他熒光蛋白, 該熒光標(biāo)記具有標(biāo)記基因小、背景低等優(yōu)點, 且與已報道的dsred2紅色熒光基因相比, 其熒光強(qiáng)度及穩(wěn)定性更好。目前已成功在多種菌株中進(jìn)行標(biāo)記：如：（1）成功在蒙氏腸球菌ST4SA和植物乳桿菌423中進(jìn)行mCherry熒光蛋白標(biāo)記；（2）在植物乳桿菌中進(jìn)行mCherry熒光蛋白標(biāo)記，是探究其在生物體內(nèi)的定位、示蹤及益生性作用機(jī)制的有效技術(shù)手段^[5]。

三種熒光標(biāo)記各有優(yōu)點，可以針對不同的菌株和實驗?zāi)康倪x擇熒光標(biāo)記。銳志魔方生物在菌株熒光標(biāo)記實驗上具有豐富的實踐經(jīng)驗，成功設(shè)計并保存多種熒光標(biāo)記載體，可以極大縮短客戶在熒光標(biāo)記實驗上的周期。也可根據(jù)客戶不同菌株設(shè)計相應(yīng)啟動子進(jìn)行熒光標(biāo)記實驗。目前已成功利用三親本結(jié)合、電轉(zhuǎn)等不同實驗方式，在多種菌株中成功構(gòu)建不同的熒光標(biāo)記。