Annexin V-EGFP / 7-AAD雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/1/11 10:09:56
- 訪問次數(shù) 313
聯(lián)系方式：張經(jīng)理18930271235 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
保存溫度
2-8℃避光
注意事項
1.開蓋前請離心。
2.開蓋后組份按要求條件保存。
3.拆封后請盡快使用完！
2.開蓋后組份按要求條件保存。
3.拆封后請盡快使用完！
有效期
1年
檢測方法
1.流式細(xì)胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
適用樣本
1.懸浮細(xì)胞
2.貼壁細(xì)胞
2.貼壁細(xì)胞
產(chǎn)品特點(diǎn)
1.方便：可用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測；
2.快速：1小時內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)；
3.準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計數(shù)各群細(xì)胞的比例。
2.快速：1小時內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)；
3.準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計數(shù)各群細(xì)胞的比例。
產(chǎn)品應(yīng)用
1.流式細(xì)胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
儀器準(zhǔn)備
1.流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS 緩沖液（pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
使用注意事項
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導(dǎo)致試劑量不夠用。
2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。離心力在不損失細(xì)胞的前提下盡可能小，重懸細(xì)胞是動作要輕柔，避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標(biāo)記后將細(xì)胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細(xì)胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此在染色后立即進(jìn)行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細(xì)胞。不要固定細(xì)胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
2.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。離心力在不損失細(xì)胞的前提下盡可能小，重懸細(xì)胞是動作要輕柔，避免多次反復(fù)的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標(biāo)記后將細(xì)胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細(xì)胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此在染色后立即進(jìn)行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細(xì)胞。不要固定細(xì)胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
使用方法
樣品染色：
1. 離心收集懸浮細(xì)胞。離心機(jī)約300×g力，2-8°C，離心時間5分鐘，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。
3. 用400 μl 1X Annexin V結(jié)合液重新懸浮細(xì)胞，濃度大約為1×106 cells/ml。
4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5 μl Annexin V-EGFP染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。
5. 加入5-10 μl 7-AAD染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育2-5分鐘。 6. 立即用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。
1. 離心收集懸浮細(xì)胞。離心機(jī)約300×g力，2-8°C，離心時間5分鐘，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。
3. 用400 μl 1X Annexin V結(jié)合液重新懸浮細(xì)胞，濃度大約為1×106 cells/ml。
4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5 μl Annexin V-EGFP染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。
5. 加入5-10 μl 7-AAD染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育2-5分鐘。 6. 立即用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。
常見問題分析
實(shí)驗(yàn)過程中Annexin V染不上色或陽性率偏低?？赡艿脑蛉缦拢?br>1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 確定實(shí)驗(yàn)中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡?？赏ㄟ^設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細(xì)胞未啟動凋亡。重新確定誘導(dǎo)后凋亡啟動的時間點(diǎn)（時程實(shí)驗(yàn)）。
4. 細(xì)胞數(shù)量偏少。增加細(xì)胞數(shù)量。
5. 貼壁細(xì)胞消化不當(dāng)。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實(shí)驗(yàn)過程中陽性率偏高?？赡艿脑蛉缦拢?br>1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 細(xì)胞本身活力太差。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導(dǎo)凋亡的對照細(xì)胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細(xì)胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細(xì)胞本身活力太差。建議用臺盼藍(lán)染色計算細(xì)胞的活力，臺盼藍(lán)拒染的細(xì)胞應(yīng)大于95%。若活力偏低低，建議重新復(fù)蘇細(xì)胞，通常剛復(fù)蘇的細(xì)胞至少要傳代3 次以后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2. 確定實(shí)驗(yàn)中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡?？赏ㄟ^設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細(xì)胞未啟動凋亡。重新確定誘導(dǎo)后凋亡啟動的時間點(diǎn)（時程實(shí)驗(yàn)）。
4. 細(xì)胞數(shù)量偏少。增加細(xì)胞數(shù)量。
5. 貼壁細(xì)胞消化不當(dāng)。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實(shí)驗(yàn)過程中陽性率偏高?？赡艿脑蛉缦拢?br>1. 用于檢測的流式細(xì)胞儀/顯微鏡設(shè)置不當(dāng)。調(diào)整使用正確的儀器設(shè)置。
2. 細(xì)胞本身活力太差。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導(dǎo)凋亡的對照細(xì)胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細(xì)胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細(xì)胞本身活力太差。建議用臺盼藍(lán)染色計算細(xì)胞的活力，臺盼藍(lán)拒染的細(xì)胞應(yīng)大于95%。若活力偏低低，建議重新復(fù)蘇細(xì)胞，通常剛復(fù)蘇的細(xì)胞至少要傳代3 次以后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
參考文獻(xiàn)
1.Hongjuan Li, et al.
Nucleus-targeted nano delivery system eradicates cancer stem cells by combined thermotherapy and hypoxia-activated chemotherapy
Biomaterials 2019 （IF=10.317）
2.Wei Bing, et al.
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
Small 2016 （IF=11.459）
3.Linchong Sun, et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Cell Research 2015 （IF=20.507） 4.Kerong Deng, et al.
Enhanced Antitumor Efficacy by 808 nm Laser-Induced Synergistic Photothermal and Photodynamic Therapy Based on a Indocyanine-Green-Attached W18O49 Nanostructure
Advanced Functional Materials 2015 （IF=16.836）
5.Wenqiao Zang, et al.
miR-663 attenuates tumor growth and invasiveness by targeting eEF1A2 in pancreatic cancer
Molecular Cancer 2015 （IF=15.302）
Nucleus-targeted nano delivery system eradicates cancer stem cells by combined thermotherapy and hypoxia-activated chemotherapy
Biomaterials 2019 （IF=10.317）
2.Wei Bing, et al.
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
Small 2016 （IF=11.459）
3.Linchong Sun, et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Cell Research 2015 （IF=20.507） 4.Kerong Deng, et al.
Enhanced Antitumor Efficacy by 808 nm Laser-Induced Synergistic Photothermal and Photodynamic Therapy Based on a Indocyanine-Green-Attached W18O49 Nanostructure
Advanced Functional Materials 2015 （IF=16.836）
5.Wenqiao Zang, et al.
miR-663 attenuates tumor growth and invasiveness by targeting eEF1A2 in pancreatic cancer
Molecular Cancer 2015 （IF=15.302）
采購中心
化工儀器網(wǎng)