一、概述
無細胞蛋白表達是一種體外重組蛋白質表達技術也稱為無細胞蛋白質合成技術（CFPS：Cell-freeproteinsynthesis），是指用含有蛋白合成必需的組分（核糖體，轉運RNA，氨酰合成酶，啟動/延伸/終止因子，三磷酸鳥苷，ATP，Mg2+和K+）的細胞裂解物在體外進行蛋白合成。
無細胞蛋白表達技術適用于制備各種類型的蛋白質，包括難表達蛋白質、毒性蛋白質、復雜蛋白質等。在藥物研究、生物制造和生命科學等領域中得到廣泛關注和應用，無論是研究、開發(fā)還是商業(yè)化應用過程。目前無細胞蛋白表達主要應用于藥物研發(fā)領域，例如抗體制備和生物藥物生產等。隨著人工智能技術的不斷發(fā)展，無細胞蛋白表達技術可以與人工智能算法結合，構建計算機輔助的高通量生產系統(tǒng)，實現(xiàn)個性化、精準的生物醫(yī)學治療。除此之外，還能夠應用于其他領域，例如基因工程、環(huán)境保護和農業(yè)生產等。隨著無細胞蛋白表達技術的不斷發(fā)展和人工智能技術的不斷進步，我們可以看到更多的新領域和新應用出現(xiàn)，給生物科技行業(yè)帶來更多的機遇和挑戰(zhàn)。

圖1：典型無細胞蛋白表達的工作流程

二、技術原理
CFPS系統(tǒng)使用微生物、植物或動物的粗細胞裂解物中的成分來合成蛋白質。常用的粗提取物是大腸桿菌、兔網織紅細胞、小麥胚芽（WGE）、昆蟲細胞或市售的純化重組元件系統(tǒng)（PURE）。CFPS系統(tǒng)的制備是一個簡單的過程，其中目的細胞過夜生長，稀釋，并進一步生長，直到光密度達到0.8至1.0，之后收獲細胞并超聲處理以提取細胞裂解物。然后將添加了必要輔因子、能量源、核苷酸、底物、氨基酸和tRNA的緩沖混合物添加到細胞提取物中，將其轉化為CFPS和無細胞轉錄-翻譯（TX–TL）系統(tǒng)。
CFPS系統(tǒng)的一般方案如圖3所示，該實驗使用含有必要細胞裂解物和DNA（線性或質粒）的緩沖液，以及相關的能量源、核苷酸、氨基酸、鹽和輔因子，共同維持反應以合成感興趣的產物。CFPS的合成產物可能因多種化學或生物部分而異，包括病毒、治療劑、抗體、化學品、生物燃料和蛋白質。在合成此類產物時，CFPS系統(tǒng)相對于體內系統(tǒng)具有直接優(yōu)勢，特別是考慮到該技術的相對速度、簡單性和有效性。通常，體內系統(tǒng)是耗時的，并且往往比CFPS系統(tǒng)有更多的步驟。

 圖2：在單管中進行的CFPS系統(tǒng)的示意圖

三、技術細節(jié)
1
反應體系
反應體系的搭建是無細胞蛋白表達實驗的關鍵，為保證反應的高效性和可重復性，需要精心構建反應體系，包括選用合適的模板、化學物質、電解質、抗氧化劑和各種工具等。
2
反應條件
需要根據(jù)實驗要求調整反應條件，包括溫度、離子強度、pH、反應時間等多個方面，有利于促進核苷酸的轉錄和翻譯，以及蛋白質的自組裝和成型。
3
生產規(guī)模
無細胞蛋白表達技術可以擴大生產規(guī)模，提高生產效率，但需要保證反應體系的穩(wěn)定性和可重復性，同時要保證反應環(huán)境的清潔和消毒，以避免其他污染物的進入，從而影響蛋白質的純度和活性。
四
技術優(yōu)勢
1
更高的蛋白質表達量
傳統(tǒng)的活細胞蛋白表達技術受限于細胞本身的多方面因素，其表達的蛋白質數(shù)量往往受到限制。而無細胞蛋白表達技術通過在體外底物濃度高的環(huán)境中進行合成反應，不但避免了傳統(tǒng)活細胞表達所面臨的方方面面的限制，還能夠很好地控制反應體系，從而獲得表達量更高的蛋白質。
2
更快的表達速度
傳統(tǒng)活細胞蛋白表達需要細胞生長并達到最佳密度時才能進行蛋白質表達，這個過程往往需要數(shù)天時間。而無細胞蛋白表達技術通常只需要數(shù)小時就能夠完成蛋白質的表達，這個速度明顯快于傳統(tǒng)活細胞表達技術。
3
更精準的蛋白質合成
無細胞蛋白表達技術在體外進行蛋白質合成，能夠精確控制底物濃度、反應溫度、反應劑比例等參數(shù)，因此可以更加精準地合成定制的蛋白質，這對于研究和應用來講具有重要意義。
4
更靈活控制
在無細胞蛋白表達技術中，可以使用分離的組分體系進行蛋白質的合成，可以控制底物和反應劑的比例，也可以在適當?shù)姆磻獥l件下進行自定義的修飾，如蛋白質標記、藥效分析等。這些優(yōu)點使得無細胞蛋白表達技術更加靈活、可控，適用于更廣泛的應用領域。

 圖3：體內細胞和體外無細胞蛋白質合成比較