LumiMAT™ 熱原檢測試劑盒

LumiMAT™是基于MAT法（單核細(xì)胞活化反應(yīng)測定法，Monocyte Activation Test）開發(fā)的熱原（Pyrogen）檢測試劑盒。

熱原是導(dǎo)致動物體溫升高的物質(zhì)的總稱，非口服藥和與直接接觸血液的醫(yī)療器械不可被熱原污染。家兔熱原試驗(yàn)是早期廣泛用于熱原檢測的實(shí)驗(yàn)方法，該方法通過向兔靜脈中注射待測樣品并觀察其體溫變化來判斷是否存在熱原。但家兔熱原試驗(yàn)在再現(xiàn)性、精確度、成本等方面存在問題，因此鱟試劑作為替代法被廣泛使用。然而，鱟試劑無法檢測出非內(nèi)毒素?zé)嵩?，因此必要時(shí)也會使用家兔熱原試驗(yàn)。

MAT法是作為家兔熱原試驗(yàn)的替代法而開發(fā)的In vitro熱原檢測實(shí)驗(yàn)，不僅可檢測內(nèi)毒素，還能檢測非內(nèi)毒素?zé)嵩?/span>

◆產(chǎn)品概要

本產(chǎn)品是用于檢測非口服藥品和醫(yī)療器械中混入或附著的熱原的MAT法試劑，需與LumiMAT Pyrogen Detection Kit - Cells（產(chǎn)品編號：298-36991）配合使用，不僅可以檢測內(nèi)毒素，還可檢測大部分非內(nèi)毒素?zé)嵩?/span>

◆試劑盒組成

● 細(xì)胞用培養(yǎng)基：20 mL

● 稀釋用培養(yǎng)基：100 mL

● 發(fā)光檢測緩沖液：12 mL

● 發(fā)光底物：240 μL

◆檢測原理

MAT法是利用人單核細(xì)胞被熱原激活后產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子等物質(zhì)來檢測熱原的方法。

傳統(tǒng)的MAT法

使用PBMC（外周血單核細(xì)胞）作為細(xì)胞來源，通過ELISA法檢測單核細(xì)胞中釋放的細(xì)胞因子，從而檢測樣品中的熱原。

LumiMAT

LumiMAT™使用單核細(xì)胞系NOMO-1，其引入熒光素酶報(bào)告基因，通過表達(dá)熒光素酶蛋白以響應(yīng)因暴露于熱原而激活的 NF-kB信號。當(dāng)熱原與Toll-like Receptor（TLR）結(jié)合后，NF-κB信號會被激活，從而表達(dá)熒光素酶蛋白。當(dāng)向其加入發(fā)光底物后，會發(fā)生發(fā)光反應(yīng)，可通過檢測發(fā)光強(qiáng)度檢測熱原。

LumiMAT™的特點(diǎn)

◆檢測步驟

進(jìn)行檢測時(shí)，需要LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Cells（產(chǎn)品編號：298-36991）和LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Reagent Set（產(chǎn)品編號：297-96801）一同使用。

向96孔板中添加待測樣品或內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，添加報(bào)告細(xì)胞后孵育3 h。然后添加發(fā)光底物，使用酶標(biāo)儀檢測發(fā)光強(qiáng)度。與傳統(tǒng)的ELISA法檢測相比，LumiMAT™在同一個(gè)平板中進(jìn)行檢測，可減少實(shí)驗(yàn)差異。此外，傳統(tǒng)方法需要1.5 天，而LumiMAT™僅需5 h左右即可得到檢測結(jié)果。

標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍

RLU：Relative Light Unit（相對光強(qiáng)度）

EU：Endotoxin Unit（內(nèi)毒素單位）

使用內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以Endotoxin Equivalents（EE)/mL計(jì)算熱原含量。

標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：0.0125～0.8 EE/mL

◆檢測數(shù)據(jù)

再現(xiàn)性

使用3個(gè)批次的LumiMAT™，檢測準(zhǔn)確率和精確度（n=4，各批次分別檢測3次）。添加6個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品（USP-RSE），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度（EU/mL）。

已確認(rèn)所有批次的準(zhǔn)確率（檢測值/標(biāo)準(zhǔn)值）都在±10%以內(nèi)，精確度都在CV20%以下，具有高再現(xiàn)性。

對非內(nèi)毒素?zé)嵩∟EP，Non-Endotoxin Pyrogen）的反應(yīng)性

向各Toll-like receptor (TLR)中添加不同濃度的非內(nèi)毒素?zé)嵩∟EP），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每種NEP的濃度（EE/mL）?？v軸：EE/mL，橫軸：添加的NEP濃度

已確認(rèn)不同濃度的NEP均可檢測。

◆加標(biāo)回收測試

1.使用市售藥品進(jìn)行加標(biāo)回收測試

向各種藥品中添加內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算回收率。

*MVD : 最大有效稀釋倍數(shù)（Maximum Valid Dilution）

**無干擾的標(biāo)準(zhǔn): 50 < 回收率(%) < 200

在MVD范圍的稀釋倍率內(nèi)，所有藥品的回收率均在50~200%的范圍內(nèi)。

2.使用藥品原料進(jìn)行加標(biāo)回收測試

適用于各種樣品的檢測。

LumiMAT™采用NanoLuc®技術(shù)。NanoLuc® 技術(shù)由Promega Corporation授權(quán)。授權(quán)專-利：美國專-利第8557970號、美國專-利第8669103號以及與美國專-利第8557970號、美國專-利第8669103號享有同等優(yōu)先權(quán)的所有專-利及申請中的專-利。NanoLuc® 為Promega Corporation的注冊商標(biāo)。

◆產(chǎn)品列表