大鼠氣道上皮細(xì)胞（原代）
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
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- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/12 14:11:21
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一、大鼠氣道上皮細(xì)胞簡(jiǎn)介：
氣道上皮細(xì)胞分布于氣管內(nèi)表面，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，胞體肥厚、透明，呈菱形或多角形，形成多個(gè)小島樣克隆。氣道上皮是與外界環(huán)境接觸的道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。氣道上皮細(xì)胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代氣道上皮細(xì)胞因與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
本公司生產(chǎn)的大鼠氣道上皮細(xì)胞采用酶解法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶，CK-18、CK-19免疫熒光染色呈陽(yáng)性，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí)， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后打開(kāi)瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng)，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞貼壁后， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過(guò)夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存）。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無(wú)菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細(xì)胞， 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；氣道上皮細(xì)胞分布于氣管內(nèi)表面，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，胞體肥厚、透明，呈菱形或多角形，形成多個(gè)小島樣克隆。氣道上皮是與外界環(huán)境接觸的道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。氣道上皮細(xì)胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代氣道上皮細(xì)胞因與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。
本公司生產(chǎn)的大鼠氣道上皮細(xì)胞采用酶解法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶，CK-18、CK-19免疫熒光染色呈陽(yáng)性，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí)， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后打開(kāi)瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng)，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞貼壁后， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過(guò)夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存）。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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