BJ6003 丙酮酸激酶試劑盒 糖酵解系列-常備現(xiàn)貨
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BJ6003
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/4/11 17:50:51
- 訪問次數(shù) 26
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BJ6003 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 丙酮酸激酶試劑盒 |
丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
PK（EC 2.7.1.40）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化糖酵解過程中的最后一步反應(yīng)，是糖酵解過程中的主要限速酶之一，也是產(chǎn)生ATP 的關(guān)鍵酶之一，因此測定PK 活性具有重要意義。
測定原理：
PK 催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP 生成ATP 和丙酮酸，乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化NADH 和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在 340nm 下測定NADH 下降速率，即可反映 PK 活性。
丙酮酸激酶試劑盒 糖酵解系列-常備現(xiàn)貨
組成：
產(chǎn)品名稱 | BJ6003-50T/48S | Storage |
提取液：液體 | 60ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 2 瓶 | -20℃ |
試劑三：液體 | 25μl×2 | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
樣本的前處理:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1） 試劑二的配制：臨用前取試劑二一瓶，加入 22.5ml 試劑一和 2.65ml 蒸餾水充分溶解，置于 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min；現(xiàn)配現(xiàn)用。
（2） 試劑三的配制：臨用前取試劑三一支，加入 1.5ml 蒸餾水充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用。
（3） 在 1ml 石英比色皿中加入 50μl 樣本、50μl 試劑三和 900μl 試劑二，混勻，立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值A1 和 2min20s 后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
PK 活性計(jì)算:
1、血清（漿）中 PK 活力的計(jì)算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=2613×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 PK 活力的計(jì)算:
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2613×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=2613×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=5.226×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，9.75×10-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
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