FlashPure FFPE Total RNA Mini Kit

石蠟包埋組織總 RNA 快速提取試劑盒

石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒帶gDNA過濾器

目錄號：91310

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇、二甲苯

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

產(chǎn)品簡介

適用于快速從福爾馬林固定、石蠟包埋組織樣品中提取總RNA，提取的RNA，可用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測序、RACE等。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全過程僅需 30 min！

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟

第一次使用前，請先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

1. 修整去除過量包埋組織外石蠟，并切成 5~20 μm 厚切片，開始的 2~3片拋棄不用。

2. 收集總厚度不超過■40 μm 的石蠟切片到一個(gè) 2.0 ml 離心管中（例如：2 片 20μm、4 片 10μm、8 片 5μm 的石蠟切片），或者不超過▲80 μm的石蠟切片到一個(gè) 2.0 ml 離心管中。

■代表處理切片總厚度≤40 μm，▲代表處理切片總厚度≤80 μm

3. 加入 1 ml 100%二甲苯，渦旋振蕩 10 sec。瞬間離心把組織全部浸入到二甲苯。

4. 50℃水浴 3 min 熔解石蠟，20~25℃最高速離心 2 min，收集到管底。

5. 小心吸棄上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。

6. 加入 1 ml 無水乙醇，渦旋振蕩，最高速離心 2 min，小心吸棄上清乙醇。

7. 加入 1ml 無水乙醇，重復(fù)步驟 6 一遍，盡可能吸棄所有乙醇。

8. 室溫或者 37℃晾干乙醇 10 min，或直到所有乙醇揮發(fā)干。

乙醇wan全晾干非常重要，微量的乙醇?xì)埩粢矔?huì)導(dǎo)致 RNA 產(chǎn)量降低。

9. 加入■150 μl ▲240 μl 裂解液 PKD，渦旋振蕩（或者吹打），充分重懸組織沉淀，短暫離心收集液體到管底，加入 10 μl 蛋白酶 K，吹打混勻。

10. 55℃孵育 15min，然后 80 ℃孵育 15min。

55℃孵育后，可以將離心管取出放置在室溫，等水浴鍋溫度升到 80℃后再放入水浴鍋，精確的孵育 15min。即使 2min 的延長也可能導(dǎo)致 RNA的部分降解。

11. 加入■320 μl ▲500 μl 結(jié)合液 RBC，充分吹打混勻，調(diào)節(jié)結(jié)合條件。

12. 轉(zhuǎn)移混合液至 gDNA 過濾器中，14,000 rpm 離心 30 sec，收集濾液（RNA 在濾液中）。

應(yīng)避免吸到較大的未消化wan全的絮團(tuán)物質(zhì)上柱，以免堵塞離心柱。

13. 加入■720 μl ▲1200 μl 無水乙醇到濾過液中，吹打混勻。

14. 將≤750 μl 濾液混合液加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。此時(shí)，RNA 被吸附在膜上。重復(fù)此過程，直到溶液全部上柱。

15. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

16. 重復(fù)步驟 15 一次。

17. 將RNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心 2 min，除去乙醇。

18. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase~free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30 μl 的 RNase~free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

19. 提取的總 RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于~70℃保存，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118~100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710~100 Script III All~in~one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600~500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒帶gDNA過濾器