基于Edman降解的蛋白N端序列分析檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

表達(dá)純化后的蛋白產(chǎn)物，特別是蛋白品的分析過程中，需要對(duì)蛋白的末端進(jìn)行驗(yàn)證，以保證表達(dá)純化產(chǎn)物的N端和C端序列準(zhǔn)確。Edman降解法是蛋白的N端序列分析中非常成熟的方法之一，有著廣泛的應(yīng)用。百泰派克公司采用島津公司Edman測序系統(tǒng)，為廣大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產(chǎn)物、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務(wù)。采用我們的測序系統(tǒng)，可以測定N端30個(gè)氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統(tǒng)，可以測定N端的60-70個(gè)氨基酸。百泰派克公司也建立了以優(yōu)良的LC-MS/MS技術(shù)進(jìn)行N-端測序的平臺(tái)，可以測出封閉和修飾的蛋白質(zhì)末端，與Edman降解法形成互補(bǔ)，保證N端測序服務(wù)的順利進(jìn)行。 在蛋白質(zhì)測序前，蛋白樣品首先經(jīng)過SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿足測序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉(zhuǎn)移到PVDF膜上；經(jīng)過染色確定把蛋白條帶并切出；使用Edman測序儀對(duì)得到的PVDF膜上的蛋白樣品進(jìn)行分析。Edman降解測序是通過循環(huán)反應(yīng)從蛋白質(zhì)的N端開始逐個(gè)鑒定氨基酸的種類，從而對(duì)蛋白質(zhì)的N端序列進(jìn)行測定。每一個(gè)Edman測序反應(yīng)包括3步：dìyī步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結(jié)合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結(jié)合的殘基轉(zhuǎn)化成為更為穩(wěn)定的PTH殘基，經(jīng)過在線的HPLC分析，根據(jù)洗脫時(shí)間確定氨基酸種類。

Edman測序反應(yīng)過程

基于Edman降解的蛋白質(zhì)N端測序服務(wù)流程

Edman測序?qū)嶒?yàn)流程圖

應(yīng)用領(lǐng)域

• 蛋白表達(dá)產(chǎn)物的驗(yàn)證：重組蛋白插入位點(diǎn)和表達(dá)順序是否正確； • 細(xì)胞株建立和發(fā)酵過程中蛋白產(chǎn)物的驗(yàn)證：驗(yàn)證細(xì)胞株建立和發(fā)酵過程中蛋白產(chǎn)物N端jiǎliúānsuān和信號(hào)肽是否正確處理； • 蛋白降解/酶切分析：對(duì)降解/酶切形成的新蛋白片段N端進(jìn)行分析，確定斷裂/酶切位點(diǎn)； • De-novo測序：對(duì)于蛋白數(shù)據(jù)庫中不存在的全新蛋白序列進(jìn)行分析。

關(guān)于樣品

PVDF膜類樣品的準(zhǔn)備過程 1.樣品電泳和電轉(zhuǎn) a. 對(duì)蛋白樣品進(jìn)行1D或者2D跑膠 b. 將蛋白膠上的樣品轉(zhuǎn)移至PVDF膜上；注意：千萬不要使用硝酸纖維素膜（Nitrocellulose membranes） c. 在此過程中請(qǐng)佩戴手套和頭套，避免自身角蛋白對(duì)測序結(jié)果的影響 2.PVDF膜的染色 a. 染色過程中可以使用考馬斯亮藍(lán)或者立春紅對(duì)PVDF膜進(jìn)行染色；注意：千萬不要使用銀染的方法進(jìn)行染色 b. 染色完成之后，可以使用雙蒸水對(duì)PVDF膜進(jìn)行清洗 c. 如果轉(zhuǎn)膜的緩沖液中含有g(shù)ānānsuān，需要對(duì)PVDF膜進(jìn)行多次沖洗，以避免gānānsuān對(duì)后續(xù)分析的影響 d. 更詳細(xì)的樣品準(zhǔn)備步驟，見Edman測序樣品準(zhǔn)備Protocol 3.靶蛋白條帶獲取 a. PVDF膜染色后，靶條帶清晰可見，用潔凈的jiěpōudāo將靶蛋白條帶切下 b. 在蛋白量允許的情況下，可以準(zhǔn)備2-3條靶條帶以增加靶蛋白的量 4.樣品運(yùn)輸 對(duì)切下的蛋白條帶進(jìn)行密閉包裝，使用冰袋運(yùn)輸即可 溶液樣品的準(zhǔn)備過程 1.蛋白的純度和用量 a. 樣品需要量在1-10 ug b. 樣品純度要＞90% c. Buffer中不要使用表面活性劑，并盡可能降低溶液的鹽濃度 d. Tris, glycine, guanidine, glycerol, sucrose, ethanolamine, SDS, Triton, X-100, Tween和其他的去垢劑，ammonium sulfate和其他的銨鹽均會(huì)對(duì)后續(xù)的氨基酸鑒定產(chǎn)生影響，在樣品準(zhǔn)備過程中要避免使用 e. 樣品準(zhǔn)備過程全程佩戴口罩和頭套，避免角蛋白的影響 2.蛋白樣品的運(yùn)輸 a. 液體樣品推薦干冰運(yùn)輸 b. 液體樣品也可以在冷凍抽干或者真空抽干后，使用冰袋運(yùn)輸

研究案例

如下圖所示，通過Edman測序，可提供鑒定的氨基酸的詳細(xì)信息。

Edman測序研究案例

中/英文項(xiàng)目報(bào)告

在技術(shù)報(bào)告中，百泰派克會(huì)為您提供詳細(xì)的中英文雙語版技術(shù)報(bào)告，報(bào)告包括： 1. 實(shí)驗(yàn)步驟（中英文） 2. 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)（中英文） 3. 蛋白質(zhì)N端測序的詳細(xì)信息 4. 質(zhì)譜圖片 5. 原始數(shù)據(jù)

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對(duì)蛋白質(zhì)序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對(duì)蛋白質(zhì)的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質(zhì)N端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的蛋白質(zhì)，提供基于從頭測序法的蛋白質(zhì)從頭測序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質(zhì)組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白質(zhì)組學(xué)、靶向蛋白質(zhì)組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白質(zhì)組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種蛋白質(zhì)標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質(zhì)、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白質(zhì)組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

基于Edman降解的蛋白N端序列分析檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹