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LC-MS/MS法測(cè)定食用油脂中的辣椒素

檢測(cè)樣品:食用油脂

檢測(cè)項(xiàng)目:辣椒素

方案概述:本文根據(jù)《BJS201801食用油脂中辣椒素的測(cè)定》建立了使用超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀EXPEC5210測(cè)定食用油脂中3種辣椒素的快速且高靈敏度的檢測(cè)方法。

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更新時(shí)間2025年03月18日

上傳企業(yè)杭州譜育科技發(fā)展有限公司

下載方案

辣椒中的辣味成分主要是天然辣椒堿,其由14種辣椒素組成。其中,天然辣椒素和二氫辣椒素占總辣椒堿的90%以上。合成辣椒素是人工合成的具有類(lèi)似天然辣椒素生物學(xué)功能的化合物,分子結(jié)構(gòu)上的活性基團(tuán)與天然辣椒素相似,但在辣度和價(jià)格方面,合成辣椒素更受青睞,因此存在被非法使用的可能。食用油脂在正常的生產(chǎn)加工過(guò)程中不接觸辣椒,不含辣椒素。而回收油脂的制作水平還不足以去除全部辣椒素。因此,可通過(guò)測(cè)定油脂中的辣椒素含量,判斷油脂的質(zhì)量。

本文根據(jù)《BJS 201801 食用油脂中辣椒素的測(cè)定》建立了使用超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀EXPEC 5210測(cè)定食用油脂中3種辣椒素的快速且高靈敏度的檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞:LC-MS/MS、3種辣椒素、大豆油

標(biāo)準(zhǔn)品、試劑和設(shè)備

    標(biāo)準(zhǔn)品:合成辣椒素、天然辣椒素、二氫辣椒素(天津阿爾塔科技有限公司,-20℃儲(chǔ)存)。

    試劑材料:甲醇、甲酸、乙腈、二氯甲烷(色譜級(jí))、氫氧化鈉、濃硫酸(分析純)、C18固相萃取小柱(500 mg,6 mL)。

    儀器:ULC 510超高效液相色譜儀(具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱)、EXPEC 5210三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀。

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液相和質(zhì)譜條件

表1 色譜及質(zhì)譜條件

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多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM),各化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞電壓(CE)等參數(shù)如下:

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圖1 辣椒素監(jiān)測(cè)離子對(duì)等質(zhì)譜參數(shù)

樣品前處理

        稱(chēng)取1 g大豆油樣品于15 mL具塞塑料試管,加入1 mL二氯甲烷,3 mL 2%氫氧化鈉溶液,渦旋10 min,4000 r/min離心10 min,取上層水相;殘留有機(jī)相再用2 mL 2%氫氧化鈉溶液重復(fù)提取2次,合并水相后,稀硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至2-3。C18 SPE小柱用3 mL乙腈淋洗3次,再用3 mL純水淋洗2次,將提取液加入小柱,每秒1-2滴,待全部溶液通過(guò)SPE小柱后,以2 mL乙腈洗脫3次,50 ℃氮吹近干,1 mL甲醇溶解后過(guò)0.22 mm有機(jī)微孔濾膜,置于進(jìn)樣瓶供LC-MS/MS測(cè)定。

線(xiàn)性

    分別準(zhǔn)確吸取辣椒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量于容量瓶中,甲醇將其稀釋成含量分別為0.1、0.2、0.5、1、5、10、50、100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列混合工作液,按照上述方法進(jìn)樣,以各目標(biāo)物的定量離子色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y),目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo),采用外標(biāo)法擬合后的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如下圖所示:在對(duì)應(yīng)線(xiàn)性范圍內(nèi)的線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2均在0.995以上,線(xiàn)性良好。

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圖2 辣椒素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

靈敏度

    測(cè)定線(xiàn)性低點(diǎn),按照S/N=3和S/N=10計(jì)算檢出限和定量限:辣椒素檢出限在0.012-0.015 mg/kg;定量限在0.039-0.050 mg/kg。

精密度

    配置0.5 ng/mL與10 ng/mL辣椒素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,考察保留時(shí)間與峰面積的重復(fù)性:保留時(shí)間RSD小于0.1 %,峰面積RSD小于4.9 %,儀器精密度良好。

樣品測(cè)試

    取1g大豆油樣品(n=3),按照2.3部分前處理后上機(jī)測(cè)試,空白及樣品測(cè)試結(jié)果如下圖所示:在對(duì)應(yīng)保留時(shí)間內(nèi),3種辣椒素均未檢出。

 

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圖4 空白及大豆油樣品TIC譜圖

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圖6 50 ng/mL大豆油樣品加標(biāo)MRM疊加譜圖

        本文建立了一種使用譜育科技三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀EXPEC 5210 測(cè)定食用油脂中辣椒素類(lèi)化合物的方法,考察了方法的線(xiàn)性、靈敏度、精密度和回收率,結(jié)果表明:3種辣椒素化合物在0.1-100 ng/mL范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性良好,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.995;檢出限在0.012-0.015 mg/kg,定量限在0.039-0.050 mg/kg;保留時(shí)間RSD在0.1%以?xún)?nèi),峰面積RSD在4.9%以?xún)?nèi);加標(biāo)回收率在70%以上;均滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)要求。本方法可以對(duì)食用油脂中辣椒素類(lèi)化合物進(jìn)行快速、準(zhǔn)確、靈敏的定量分析。

附錄

設(shè)備與耗材方案

一、EXPEC 5210配置詳情

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二、標(biāo)準(zhǔn)品

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