1 儀器與試劑

1200液相色譜儀系列，由 G1312A液相泵、G1316A柱溫箱、G1315B二極管陣列檢測器、7725手動進樣閥和25  微量進樣器組成；HJ．2磁力加熱攪拌器；PHS 3C型酸度計。利多卡因、布比卡因均為鹽酸鹽注射液，丁卡因為鹽酸鹽粉末。乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。含鹽酸利多卡因、鹽酸布比卡因和鹽酸丁卡因的標(biāo)準(zhǔn)儲備液及由其稀釋而成的標(biāo)準(zhǔn)溶液均置于4cc冰箱中保存。

健康人血漿從湖南中心血站購得（冰箱中一4O℃冷凍保存不超過 3星期），含利多卡因、布比卡因和丁卡因的加樣血漿于4℃冰箱中保存，保存時間不超過 24 h。病人血樣來自長沙市第四醫(yī)院，病人首先被一次性注入布比卡因 10．9 mg（腰麻），然后在 0．5 h內(nèi)分 4次注入利多卡因，累計量為282．9 mg （硬膜外麻醉），從實施麻醉開始計時，2 h進行*次采樣，7 h進行第二次采樣。 局部麻醉劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液 、加樣血漿溶液及病人血漿溶液，以0．1 mol／L NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至 1 1，作為本實驗的料液。

2．1 色譜條件

色譜柱：Spherigel C 柱（5 Ixm，150 mm×4．6 mm i．d．）（大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司），流速為

1．0          mL／min，檢測波長為210 nm，進樣量為 1 IxL；流動相：750 mL 0．025 mol／L三乙胺水溶液，以磷酸調(diào)pH 3．0，用 0．45 Ixm濾膜過濾，與 250 mL乙腈混勻，脫氣 10 min備用。

2．2 實驗方法

液．液．液微萃取體系含料液相、有機相和接受相 3個液相（如圖1）。在萃取瓶中加入一個微型攪拌磁子和 1 mL、pH為 l1．0的料液，緩慢加入200 IxL苯，再用25  微量進樣器抽取 ILL0．2 mol／L的鹽酸溶液，微量進樣器固定在鐵夾上，其針尖浸入到有機溶劑中，

小心按下微量進樣器的活塞，使反萃相在有機相中形成一個小液滴懸掛在針尖上。開啟攪拌器，攪拌速度為 250 r／min，萃取 45 min后，將反萃相小心抽回進樣器，直接進樣到液相色譜體系中進行分析。以萃取結(jié)束后分析物在接受相中的濃度和萃取開始前分析物在料液相的初始濃度之比計算富集因子。

3．1實際血樣的檢測

標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的色譜圖和加樣血漿經(jīng)過液一液一液微萃取后的色譜圖分別見圖4（A）和圖4（B）。由圖4（A）和圖4（B）可知，局麻藥通過 LLLME后得到了很大程度的富集。以此為依據(jù)，本實驗在優(yōu)化條件下，對實際病人的血樣進行了測定，圖4（c）和圖4（D）分別是實施利多卡因、布比卡因麻醉7 h時的病人血漿直接進樣的色譜圖和其 LLLME色譜圖。由圖4（c）可知，由于病人血樣復(fù)雜，且局麻藥的濃度較低，無法直接進行測定。比較圖4（D）和圖4（c）可知，LLLME可以消除血漿本身對局麻藥檢測的干擾，且局麻藥的濃度經(jīng)微萃取后得到了明顯富集。測得2 h后所采血樣中的利多卡因濃度為1．06 mg／L，布比卡因濃度為0．22 mg／L；7 h后所采血樣中的利多卡因濃度為0．28 mg／L，布比卡因濃度為0．06 mg／L。

說明該 LLLME—HPLC方法消除干擾能力強，靈敏度高，可以用于實際血漿樣品中局麻藥的測定。