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液相色譜法檢測牛奶分析研究

時間:2010-8-16閱讀:2999
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隨著抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中的廣泛應(yīng)用,牛奶中抗生素殘留問題日趨受到社會的重視。對此,檢測技術(shù)也迅速發(fā)展,以尋求簡便、快速、準確、敏感性高的檢測方法滿足日趨嚴格的殘留*的要求,保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全?! ?  

    1 牛奶中抗生素殘留的來源及其危害

1 .1牛奶中抗生素殘留的危害      
    牛奶是老少皆宜的營養(yǎng)品,牛奶中若含有抗生素,對長期飲用者來說無疑是等于長期服用小劑量的抗生素,對抗生素有過敏體質(zhì)的人服用殘留抗生素的乳后會發(fā)生過敏反應(yīng)。即使是正常飲用者,體內(nèi)的某些條件性致病菌易產(chǎn)生耐藥性,一旦患者再用同種抗生素治療很難奏效。

    這又促使臨診獸醫(yī)在治療過程中加大抗生素的用量。此外,牛奶中抗生素殘留會影響奶制品的品質(zhì),如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等,則殘留在其中的抗生素會抑制細菌的發(fā)酵,使產(chǎn)量和質(zhì)量降低。因此市場不允許出售抗生素殘留過量的牛奶,這樣也造成牛奶生產(chǎn)者的經(jīng)濟損失?!   ?br />    1.2 牛奶中抗生素殘留的來源      
    一般認為,對泌乳牛用藥不當或不注意安全時間是牛乳中抗生素殘留的重要因素,尤其是使用乳房灌注法治療乳腺炎時,易造成牛乳中抗生素殘留。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展,在牛飼料中添加飼料添加劑已十分廣泛,其中含量有一定比例的抗生素,主要作用是預(yù)防疾病的發(fā)生,這也是牛乳抗生素殘留重要原因。此外,在高溫季節(jié),一些不法交奶戶為防止乳的酸敗,往往向牛乳中摻雜各種抗生素,這也是乳中抗生素殘留的一個來源?! ?br /> 
    2 牛奶中的抗生素殘留檢測方法研究進展   
    2.1微生物檢測法   
    微生物檢測法是應(yīng)用較廣泛的方法,如紙片法、TTC法等等,因其測定原理基于抗生素對微生物的生理機能、代謝的抑制作用,因而與臨床應(yīng)用的要求一致,但其測定時間長且結(jié)果誤差較大。目前趨向靈敏、準確、簡便、快速的微生物檢測方法研究,如酶標抗體檢測法等。  
    2.1.1紙片法   
    紙片法,即PD法(Paper Disc)。常用的紙片法有枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法。這兩種方法主要用來檢測牛奶中的β-內(nèi)酰胺類抗生素,其操作過程基本相同,而選用的菌種不同??莶輻U菌紙片法檢測的結(jié)果易出現(xiàn)假陽性,為了確定陽性物質(zhì)是否為青霉素(或β-內(nèi)酰胺類),對加熱后的乳樣用青霉素酶處理,以滅活乳樣中的青霉素。然后再行檢測,檢測限可達0.01IU/mL。而嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法不僅用于檢測奶樣中β-內(nèi)酰胺類抗生素,并能暗示是還存在其他抑菌物質(zhì),檢測限可達0.008IU/mL以下。一般在4h內(nèi)即可獲得有關(guān)乳中是還存在β-內(nèi)酰胺抗生素殘留的結(jié)果。因此,在實踐中,嗜熱脂肪桿菌紙片法在奶樣的檢測中比枯草桿菌紙片法應(yīng)用更為廣泛。1991年,神保勝彥對紙片法作了進一步研究和改進。改進后的方法不僅能夠確定抗生素的種類,而且提高了檢出率和準確率,對氯霉素更低檢出量0.01ppm,土霉素0.05ppm,鏈霉素1ppm,紅霉素0.05ppm,青霉素0.0025ppm?!?br />    2.1.2 TTC法   
    TTC法,即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride),這是目前我國食品衛(wèi)生標淮中規(guī)定的檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法(GB5409?85)。如果牛乳中有抗生素存在,當乳中加入菌種(嗜熱鏈球菌)經(jīng)培養(yǎng)后,菌種不增殖,此時加入的TTC指示劑不發(fā)生還原反應(yīng),所以仍呈無色狀態(tài);如果沒有抗生素存在,則加入菌種即行增殖,TTC還原變成紅色,使樣品染成紅色,即牛乳的顏色不變?yōu)殛栃?,染成紅色為陰性。檢測各種抗生素的靈敏度(更低檢出量):青霉素0.004U/ml,鏈霉素0.5 U/ml,慶大霉素0.4 U/ml,卡那霉素5 U/ml。   
    一些文獻報道了我國標TTC法測定的我國部分地區(qū)市售牛乳中抗生素殘留的情況。1988年,周樹南[6]對江蘇省8市10個牧場生奶、消毒牛奶和奶粉中抗生素殘留情況進行調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)生奶陽性率3.6%,消毒牛奶11.4%,奶粉39.58%。

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