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公司動(dòng)態(tài)
DNA片段純化常見問(wèn)題
點(diǎn)擊次數(shù)：3656 發(fā)布時(shí)間：2011-5-23
DNA片段純化常見問(wèn)題
1、DNA回收率低
A、溶膠液用量過(guò)少
準(zhǔn)確計(jì)算凝膠的重量，按比例加入溶膠液。
B、凝膠塊未*融化
加入溶膠液后，置于55℃~60℃進(jìn)行水浴，如有必要加入更多量的溶膠液。
C、電泳緩沖液使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不新鮮
換用新配制的電泳緩沖液。
D、片段過(guò)小，<200 bp
加入1倍體積的異丙醇。
E、片段>10kb
加入洗脫液后，將吸附柱置于60℃，溫育15分鐘后進(jìn)行離心洗脫。
F、洗脫液使用不正確
洗脫液pH在7.0~8.5之間時(shí)洗脫效果，pH過(guò)高或者過(guò)低，都將顯著影響洗脫效率，請(qǐng)使用試劑盒配送的洗脫液進(jìn)行洗脫（10 mM Tris-HCL，pH8.5），使用ddH2O洗脫時(shí)請(qǐng)保證pH值在此范圍內(nèi)。
G、洗脫液加入位置不正確
使用較小洗脫體積洗脫時(shí)，洗脫液應(yīng)加在膜的中央。
H、起始產(chǎn)物量低
若初始回收產(chǎn)物的量很低，應(yīng)先富集，增大起始產(chǎn)物量。
2、未回收到DNA
DNA Wash Buffer中未加入乙醇
加入規(guī)定用量的無(wú)水乙醇，使用后旋緊瓶蓋，以防乙醇揮發(fā)
3、電泳時(shí)，樣品飄出點(diǎn)樣孔或后續(xù)酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)不理想
乙醇?xì)埩簦合疵撉?，?yīng)確保乙醇已去除干凈，可再次離心，以*去除殘留的乙醇后在進(jìn)行洗脫操作。
4、柱子堵塞
凝膠未*融化：加入溶膠液后，置于55℃~60℃進(jìn)行水浴，待凝膠*融化，冷卻至室溫后再過(guò)柱。
A、溶膠液用量過(guò)少
準(zhǔn)確計(jì)算凝膠的重量，按比例加入溶膠液。
B、凝膠塊未*融化
加入溶膠液后，置于55℃~60℃進(jìn)行水浴，如有必要加入更多量的溶膠液。
C、電泳緩沖液使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不新鮮
換用新配制的電泳緩沖液。
D、片段過(guò)小，<200 bp
加入1倍體積的異丙醇。
E、片段>10kb
加入洗脫液后，將吸附柱置于60℃，溫育15分鐘后進(jìn)行離心洗脫。
F、洗脫液使用不正確
洗脫液pH在7.0~8.5之間時(shí)洗脫效果，pH過(guò)高或者過(guò)低，都將顯著影響洗脫效率，請(qǐng)使用試劑盒配送的洗脫液進(jìn)行洗脫（10 mM Tris-HCL，pH8.5），使用ddH2O洗脫時(shí)請(qǐng)保證pH值在此范圍內(nèi)。
G、洗脫液加入位置不正確
使用較小洗脫體積洗脫時(shí)，洗脫液應(yīng)加在膜的中央。
H、起始產(chǎn)物量低
若初始回收產(chǎn)物的量很低，應(yīng)先富集，增大起始產(chǎn)物量。
2、未回收到DNA
DNA Wash Buffer中未加入乙醇
加入規(guī)定用量的無(wú)水乙醇，使用后旋緊瓶蓋，以防乙醇揮發(fā)
3、電泳時(shí)，樣品飄出點(diǎn)樣孔或后續(xù)酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)不理想
乙醇?xì)埩簦合疵撉?，?yīng)確保乙醇已去除干凈，可再次離心，以*去除殘留的乙醇后在進(jìn)行洗脫操作。
4、柱子堵塞
凝膠未*融化：加入溶膠液后，置于55℃~60℃進(jìn)行水浴，待凝膠*融化，冷卻至室溫后再過(guò)柱。