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125I標(biāo)記物的純化
125I標(biāo)記物反應(yīng)后,標(biāo)記物需進(jìn)行分離純化以除去游離125I-和其他雜質(zhì)。純化標(biāo)記物的方法有利用分子篩機(jī)制的凝膠過濾法、利用游離125I-與標(biāo)記物分子極性差異進(jìn)行吸附解離的離子交換層析法、按分子所帶電荷和直徑不同在電場作用下分子遷移速率不同進(jìn)行分離純化的聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PAGE)以及液相色譜法(HPLC)。
以葡聚糖凝膠(如SephadexG-50)柱層析分離純化125I標(biāo)記物為例:標(biāo)記反應(yīng)混合液經(jīng)柱層析時,需定時或定量逐管收集層析洗脫液,并用丁計(jì)數(shù)儀測定每管的放射性強(qiáng)度。通常zui先洗脫出的為聚合物雜質(zhì)放射峰,然后為含標(biāo)記物的主放射峰,隨后即為游離125I-峰。
125I-標(biāo)記物柱層析分離純化示意圖
Ⅰ.損傷和聚合標(biāo)記物;Ⅱ.125I標(biāo)記物;Ⅲ.游離125I-
標(biāo)記物貯存一段時間后可因脫碘和自身輻射造成蛋白質(zhì)破壞形成碎片,因而需對標(biāo)記物重新純化。
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