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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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牛α1-微球蛋白(α1-MG)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

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使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來(lái)檢測(cè)牛α1-微球蛋白(α1-MG),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

    用于牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中α1-微球蛋白(α1-MG)測(cè)定。

工作原理:

本試劑盒采用的生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA)測(cè)定樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)水平。向預(yù)先包被了牛α1-微球蛋白(α1-MG)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入牛α1-微球蛋白(α1-MG),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗α1-微球蛋白(α1-MG)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成 :

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說(shuō)明書(shū)

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品9600ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素標(biāo)記的抗α1-MG抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恒溫箱
  • 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項(xiàng):

  • 從2-8℃取出的試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  • 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。
  • 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
  • 免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
  • 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  • 底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

 

洗板方法:

1.手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

2.自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

 

標(biāo)本要求 :

1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

 

操作程序:

  • 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)?本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)

4800ng/L

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2400ng/L

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1200ng/L

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

600ng/L

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

300ng/L

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  • 根據(jù)代測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
  • 加樣:1)空白孔,空白對(duì)照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗α1-MG抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測(cè)樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗α1-MG抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  • 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值) 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
  • 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。

 

操作程序總結(jié):

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

 

檢測(cè)范圍:

檢測(cè)范圍:150ng/L - 4800ng/L

 

保存條件及有效期:

保存:2-8。

有效期:6個(gè)月(2-8℃)。

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