PCR檢測(cè)血中HBV DNA是判斷乙肝zui可靠的方法

    血中HBV DNA的存在是HBV感染zui為直接，zui為靈敏和zui為特異的指標(biāo)。HBV DNA檢測(cè)方法目前在國(guó)內(nèi)使用zui廣的是聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。使用PCR檢測(cè)血中HBV DNA，其臨床診療價(jià)值主要有：

    1．急性HBV感染的診斷。當(dāng)機(jī)體感染HBV時(shí)，在外周血中HBVDNA的出現(xiàn)要早于其他血清學(xué)抗原抗體指標(biāo)，并且只有HBVDNA存在才會(huì)引起感染，因此使用極為靈敏特異的PCR方法檢測(cè)HBVDNA可為急性HBV感染提供直接證據(jù)。

    2．可用于篩選獻(xiàn)血員，監(jiān)測(cè)血制品的傳染性和血源性乙肝疫苗的安全性。

    3．HBVDNAPCR檢測(cè)結(jié)果與血清免疫學(xué)檢測(cè)結(jié)果的綜合評(píng)價(jià)。乙肝“兩對(duì)半”或乙肝“六項(xiàng)”（“兩對(duì)半”加上抗HBc-IgM）的ELISA檢測(cè)，是臨床實(shí)驗(yàn)室zui常用來檢測(cè)乙肝的方法，如何看待其檢測(cè)結(jié)果與HBVDNA檢測(cè)結(jié)果之間的關(guān)系，是臨床醫(yī)師以及患者zui為關(guān)心的問題，關(guān)系到臨床治療方案的確定。

    （1）與HBsAg檢測(cè)結(jié)果的關(guān)系：在實(shí)踐中，常遇到的問題是HBsAg ELISA測(cè)定結(jié)果與HBVDNA檢測(cè)結(jié)果之間的不一致，有兩種情況：一是HBsAg陰性而HBV DNA PCR測(cè)定陽(yáng)性；二是HBsAg陽(yáng)性但HBVDNA陰性。前者可能是因?yàn)?/span>HBsAgELISA測(cè)定敏感性低，對(duì)極低濃度的HBsAg測(cè)不出，而PCR具有*的靈敏度，HBVDNA含量即使很低（甚至低至數(shù)個(gè)分子），亦可檢測(cè)出來；或HBsAg確已消失，但HBVDNA仍持續(xù)存在，病毒仍處于低水平復(fù)制狀態(tài)；再有，就是“a”抗原決定簇是HBV中和抗體作用的靶位，其相應(yīng)的編碼基因發(fā)生變異，則無法用常規(guī)的雙抗體（抗HBs）夾心ELISA方法檢出HBsAg，變異病毒株則可以逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視而持續(xù)存在，表現(xiàn)為HBsAg陰性，而HBVDNA陽(yáng)性。此外，在HBV初期感染時(shí)，也可能是有HBV DNA而無HBsAg。HBVDNA陰性才是HBV消除的明確指標(biāo)。HBsAg陽(yáng)性而HBVDNA陰性其原因一為血中BVDNA雖然存在，但是在特定的PCR檢測(cè)方法的下限以下，如有的PCR試劑靈敏度差，檢測(cè)HBVDNA的下限僅至1 000或100個(gè)拷貝。第二種可能為血中存在的HBsAg是由HBVDNA整合到人染色體與宿主基因共同表達(dá)所致，所以測(cè)不到血清中病毒DNA。通常，HBsAg陽(yáng)性血清，PCR檢測(cè)HBVDNA的陽(yáng)性率約為96％。肝組織活檢樣本HBVDNAPCR檢測(cè)陽(yáng)性率為100％。

    （2）與抗HBs的關(guān)系：HBV感染后至恢復(fù)期抗HBs陽(yáng)性，血清HBVDNAPCR檢測(cè)一般為陰性，少部分亦可為陽(yáng)性，但肝組織HBVDNAPCR陽(yáng)性率仍可高達(dá)77．3％．說明HBV仍存在于肝臟中。

    （3）與HBeAg，抗HBe和抗HBc的關(guān)系：HBeAg陽(yáng)性血清，HBVDNAPCR檢測(cè)幾乎全為陽(yáng)性，并且大部分（超過60％）含量大于10⁷拷貝／m1；HBeAg陰性而抗HBe陽(yáng)性者，絕大部分HBVDNA含量小于10³拷貝／ml，但仍有少部分（約10％）大于10⁷拷貝／ml；在HBsAg陽(yáng)性和抗HBc陽(yáng)性者中，有將近一半其血清HBVDNA含量大于10³拷貝／ml，約1／3大于10⁷拷貝／m1。慢性乙肝患者外周單個(gè)核細(xì)胞中HBVDNAPCR檢測(cè)陽(yáng)性率較高，是乙肝復(fù)發(fā)的一個(gè)主要原因。上述表明，血清HBeAg陰性和抗HBe陽(yáng)性，說明病毒復(fù)制減弱，血中HBVDNA減少，但并未*消失，并且少部分患者的HBVDNA含量還可能較高，因此，僅依靠抗原抗體檢測(cè)，難以判斷病毒復(fù)制的程度及傳染性強(qiáng)弱，PCR檢測(cè)HBVDNA應(yīng)是評(píng)價(jià)傳染性的zui可靠的方法。

    4．治療效果和抗病毒藥物的療效評(píng)價(jià)。HBV DNA檢測(cè)是乙肝病毒抗病毒治療惟一有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，目前國(guó)內(nèi)用于HBVDNA定量測(cè)定的方法基本上為聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），并以外標(biāo)準(zhǔn)作為定量依據(jù)。在臨床檢驗(yàn)中，任何一種臨床檢驗(yàn)方法對(duì)同一份病人標(biāo)本在不同的測(cè)定批次，檢測(cè)某種指標(biāo)均有一定的結(jié)果差異，不可能*一樣，就像打靶一樣，同一個(gè)人用同一支槍，槍再準(zhǔn)，人素質(zhì)再高，也是這次打10環(huán)，下次就是9．5環(huán)，再次又是10．2環(huán)，再或又是10環(huán)或只有9環(huán)。每次差異的多少跟槍和人有很大關(guān)系，像奧運(yùn)會(huì)*，每槍間的環(huán)數(shù)差異就小，像普通人，則差異就很大。臨床檢驗(yàn)也是如此。PCR用于HBVDNA定量檢測(cè)，如是使用外部標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量，再加上HBVDNA定量數(shù)值大，通常不同測(cè)定次間差異會(huì)較通常的檢驗(yàn)項(xiàng)目大，一般量值變化在一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)均可視為沒有變化，因此，當(dāng)一個(gè)HBV DNA PCR定量檢驗(yàn)結(jié)果為7．2E+08拷貝／ml的乙肝患者，在抗病毒藥物如拉米夫啶或干擾素治療，2周后，再檢測(cè)，如結(jié)果為5．2E+08拷貝／ml，再2周后，結(jié)果為9．0E+08拷貝／ml，結(jié)果在一個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)變化，說明結(jié)果沒有變化，抗病毒治療無效果。7．2E+08為7．2X10⁸的意思。

    乙肝病毒的抗病毒治療效果的判斷可以采用PCR方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)患者血循環(huán)中HBV DNA，當(dāng)患者經(jīng)抗病毒藥物治療后，HBVDNA含量持續(xù)下降，然后維持在低水平，或低至方法能檢出的含量（測(cè)定下限）以下，則說明治療有效。觀察抗病毒藥物治療效果不能憑二三次檢測(cè)結(jié)果來判斷，必須多次動(dòng)態(tài)觀察，每次檢測(cè)的間隔日數(shù)不宜太短，一般為2周左右。因?yàn)榈侥壳盀橹?，人類?duì)于病毒直到現(xiàn)在仍沒有找到有效的殺滅方法，只能是用抑制病毒的藥物如拉米夫定等治療。而HBV一旦感染機(jī)體，即體內(nèi)將終生攜帶該病毒，不可能出現(xiàn)所謂的“轉(zhuǎn)陰”，使用PCR沒有檢出來，只是說明血液中病毒的含量低于所用方法能檢出的量而已。

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