商品貨號:MS1518
英文名稱:Superoxide anion scavenging capacity Assay Kit
別名:超氧陰離子清除能力試劑盒 超氧陰離子清除能力測試盒
檢測方法:微量法
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
MS1518 -100管/96樣 | 索橋生物 | 100管/96樣 | ¥960.00元 |
測定意義:
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。
測定原理:
AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-與對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。
貨號:MS1518 規(guī)格:100 管/96 樣
超氧陰離子清除能力試劑盒說明書 微量法
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì)、 蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機(jī)體 衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。
測定原理:
AP-TEMED 系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成 NO2-,NO2-與對氨基苯磺酸和 α - 萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在 530nm 處有特征吸收峰,樣品對超氧陰離子的清除能力 與 530nm 的吸光值呈負(fù)相關(guān)。
自備實驗用品及儀器:
天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水 浴鍋。
試劑組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 1.5mL×1 支,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加 6mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三:液體 7.5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 7.5mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑五:液體 7.5mL×1 瓶,4℃避光保存。
樣品處理:
1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加入 1mL 提 取液)加入提取液,冰浴勻漿后于 4℃,10000g 離心 10min,取上清置于冰上待測。
2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì) 胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min); 然后 4℃,10000g 離心 10min,取上清置于冰上待測。
3. 培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測。
4. 粉劑藥物可配制成相同濃度,比如 1mg/mL。
測定操作:
空白管 對照管 測定管
試劑一(μ L) 10 10 10
試劑二(μ L) 40 40
H2O(μ L) 65 25
充分混勻,25℃反應(yīng) 1min
樣品(μ L) 25
試劑三(μ L) 50 50 50
試劑四(μ L) 50 50 50
試劑五(μ L) 50 50 50
充分混勻,37℃顯色 20min,于微量石英比色皿/96 孔板,以空白管調(diào)零,在 530nm 處測定對 照管和測定管的吸光值,分別記為 A 對照管和 A 測定管。
注意:空白管只需測定一次。
計算公式:
超氧陰離子清除率 I%= (A 對照管 - A 測定管) / A 對照管 x100%
注意事項:
1. 試劑一 4℃可保存 2 個月,配制好的試劑二 4℃可保存一周,建議實驗前配制,并盡快使用。
2. 樣品處理完后立即進(jìn)行測定,或者低溫保存不超過 24 小時。
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(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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