寵物檢測熒光PCR是一種基于DNA復制和擴增的技術(shù)，其適用于檢測特定序列的DNA，并從中獲得更多或全部的DNA。PCR可以在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量純的、具有特定序列的DNA分子，是現(xiàn)代分子生物學的基礎(chǔ)技術(shù)之一。而熒光PCR則是一種在傳統(tǒng)聚合酶鏈反應的基礎(chǔ)上加入熒光探針以實現(xiàn)更準確的檢測方法。
原理是這樣的：先需要收集需要檢測的寵物樣本，如口腔拭子、血液或組織等樣本。然后需要使用熱解法將其中的DNA裂解，使其變?yōu)閱捂?。接著添加兩個特異性引物單元，即“前向引物”和“反向引物”，并加入熒光探針，該探針含有一個熒光染料和一個淬滅染料，可以與細胞外核酸(GC)結(jié)合。當引物與模板相互作用時，在3'端區(qū)域上進行擴增，此時探頭發(fā)生水解，導致熒光染料從淬滅染料釋放，并且發(fā)生熒光信號釋放，以此來檢測PCR反應產(chǎn)物?？梢酝ㄟ^實驗室設(shè)備觀察PCR反應體系中熒光信號變化的趨勢，即可對樣品DNA進行定量或定性分析。
利用特定引物擴增所有目標區(qū)域內(nèi)存在的DNA，引物的設(shè)計根據(jù)目標序列的基本信息選擇合適的引物序列，使其在PCR過程中，能夠按照特定規(guī)則穩(wěn)定地結(jié)合到待擴增模板的特定位置上。與普通PCR不同，熒光PCR選用帶有熒光生物素標簽的引物，可以將擴增的目標串聯(lián)片段和引物結(jié)合成一個分子。通過Real-timePCR系統(tǒng)可以同時進行擴增反應和融合曲線分析。這樣，在后期的熒光檢測過程中，就可以對所擴增目標片段的數(shù)量進行準確的定量。
寵物檢測熒光PCR技術(shù)的其他優(yōu)勢還包括：
高度靈敏性：可以從非常小的樣本量開始擴增，探測樣本中確定污染，擴增低拷貝的模版。
高速度：相比傳統(tǒng)PCR技術(shù)，不需要進行后續(xù)電泳與染色分析，可以在更短的時間內(nèi)完成檢測。
高熱穩(wěn)定性引物和熒光探針被特意設(shè)計，確保了其在高溫下不會失活或降解。
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