目錄:北京索萊寶科技有限公司>>免疫學(xué)>>ELISA試劑盒>> SEKM-0105小鼠瘦素(Leptin)ELISA試劑盒
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
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貨號 | SEKM-0105 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 小鼠Leptin含量測定 |
小鼠瘦素(Leptin)ELISA試劑盒
注意事項(xiàng):
?1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
5. 為避免交叉污染,請?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。.
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
安全提示:
試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作小鼠員在使用時請帶上手套并注意防護(hù);在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
自備實(shí)驗(yàn)器材(不提供,可代購)?1. 酶標(biāo)儀(主波長 450nm,參考波長 630nm)2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl3. 洗板機(jī)或洗瓶4. 37℃孵育箱5. 雙蒸水,去離子水,量筒等6. 稀釋用聚丙烯試管
小鼠瘦素(Leptin)ELISA試劑盒樣本收集及儲存:1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本:室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請?jiān)俅坞x心,避免反復(fù)凍融。3. 血漿樣本:將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融。※注意:
血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值,請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。
試劑準(zhǔn)備:1. 試劑回溫:首先在實(shí)驗(yàn)前 30 min 將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。2. 配制洗滌液:預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)500?L凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為8000pg/ml),按照以下濃度進(jìn)行2倍稀釋:8000、4000、2000、1000、500、250、125、0pg/ml進(jìn)行稀釋。8000 pg/ml作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的點(diǎn)濃度,標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液(SR1)作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點(diǎn)(0pg/ml)。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液(8000pg/ml)未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖
6.洗滌方法:? 自動洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,注與吸出間隔為 30 秒,洗板 5 次。? 手工洗板:甩盡酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,靜止 30秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板 5 次。
Leptin Mouse ELISA Kit結(jié)果判斷:1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長檢測,請用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。2.計算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均 OD 值:每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo),用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中Leptin含量可通過對應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。4.若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。
2. 靈敏度:低可檢測小鼠 Leptin 濃度達(dá) 60 pg/ml,20 個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差,計算相應(yīng)的可檢測濃度。3. 特異性:不與小鼠 IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-10 R、IL-12、IL-13、 MIP-1α、MIP-1β、MIP-2、SCF、TNF-α,人的 Leptin R 反應(yīng)。?4. 重復(fù)性:板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%。
Leptin ELISA KIT(Mouse)
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