目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5875-100T/96S葡萄糖含量檢測試劑盒 微量法
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
貨號 | BC5875 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 葡萄糖含量檢測 |
葡萄糖含量檢測試劑盒(鄰甲苯胺顯色法)說明書
微量法
貨號:BC5875
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
溶液的配制:
1、 試劑一:取3.6mL試劑二、18mL冰乙酸加入試劑一混合,最后工作液為均一澄清液體。溶解好的試劑-20℃分裝避光可以保存8周。(注:若先將試劑一、試劑二混合,則溶液為無機相和水相的液體混合物,加入冰乙酸混勻后溶液會變均一澄清)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解,制備 10 mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液待用;用不完的試劑2-8℃保存4周。臨用前取30μL10mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入930μL蒸餾水,配制成0.3125mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
產(chǎn)品說明:
葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的唯*能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。
葡萄糖與鄰甲苯胺在強酸溶液中加熱,葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺縮合成葡萄糖基胺,后者脫水生成席夫(Schiff)堿,呈現(xiàn)藍(lán)綠色,在630nm處有吸收峰。該試劑盒適合測定動物組織、血清(漿)及細(xì)胞(細(xì)菌)樣本。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、分析天平、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍、冰乙酸(98% AR)、5%三氯*酸(根據(jù)注意事項確定是否需要自備)、異丙醇(根據(jù)注意事項確定是否需要自備)、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1. 血清(漿)等液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。
2. 動物組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3. 細(xì)胞/細(xì)菌:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟
1.可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至630nm,可見分光光度計蒸餾水調(diào)零。
2.操作表:(在1.5mL EP管中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 50 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | 50 | - |
蒸餾水 | - | - | 50 |
試劑一 | 200 | 200 | 200 |
渦旋混勻,100℃煮沸15min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫后,取200μL 至96孔板中測定630nm處測吸光值,分別記為A測定、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。計算ΔA測定=A測定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測 1-2 次。 |
三、葡萄糖含量計算
1. 按樣本質(zhì)量計算
葡萄糖含量(mg/mL)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V提÷W = 0.3125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
2. 按樣本蛋白濃度計算
葡萄糖含量(mg/mg prot)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(V樣×Cpr) =0.3125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
3. 按液體體積計算
葡萄糖含量(mg/mL)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷V樣= 0.3125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
4. 按細(xì)胞數(shù)量計算
葡萄糖含量(mg/104 cell)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V提÷N= 0.3125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.3125mg/mL;V提:前處理提取液體積,1mL;V樣:加入樣本體積,0.05mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;N:細(xì)胞數(shù)量,以萬計。
注意事項:
1、 試劑一具有腐蝕性,請佩戴好手套口罩,小心操作。
2、 高血脂樣本若最終反應(yīng)液出現(xiàn)渾濁,在反應(yīng)液中加入550μL的異丙醇,充分混合,可以溶解脂質(zhì),消除渾濁,測定其吸光值。計算時將所測得吸光度乘以1.5。
3、 嚴(yán)重黃疸、溶血等血清樣本,需要先制備無蛋白血濾液(建議100μL樣本加300μL 5%三氯*酸溶液,充分混合,相當(dāng)于將樣本稀釋四倍,3000rpm 4℃離心10min,取上清待測),再進行計算。注意同步修改計算公式。
實驗實例:
1. 取50μL人血清樣本,用蒸餾水稀釋5倍,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.450-0.057=0.393,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.708-0.057=0.651,按液體體積計算得:
葡萄糖含量(mg/mL)=0.3125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×5 =0.943mg/mL。
2. 取0.1g小鼠肌肉組織,按前處理和測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.168-0.057= 0.111,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.708-0.057=0.651,按液體體積計算得:
葡萄糖含量(mg/mL)=0.3125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =0.533mg/mL。
參考文獻(xiàn):
[1] Yee H Y, Goodwin J F. Evaluation of some factors influencing the o-toluidine reaction with glucose[J]. Analytical Chemistry, 2002, 45(13).DOI:10.1021/ac60335a030.
[2] Dubowski K M. An o-Toluidine Method for Body-Fluid Glucose Determination[J]. Clinical Chemistry, 1962(6) :6.DOI:10.1093/clinchem/8.6.592.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測試劑盒
BC0340/BC0345 糖原含量檢測試劑盒
BC2490/BC2495 血糖含量檢測試劑盒
BC2500/BC2505 葡萄糖含量檢測試劑盒
BC2540/BC2545 纖維素酶(CL)活性檢測試劑盒
葡萄糖含量檢測試劑盒 微量法 葡萄糖含量檢測試劑盒 微量法
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