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高鐵螯合物還原酶（FCR）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5910

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 顯色液：臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一：試劑二：試劑三=250μL：250μL：250μL（750μL，1T）的比例配制顯色液，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；

2、 標準品：臨用前加入0.71mL蒸餾水和10μL濃硫酸，配制成50μmol/mL Fe²⁺標準液。溶解好的標準品2-8℃可以保存2周。

3、 62.5nmol/mL標準溶液的配制：臨用前取50μL 50μmol/mL Fe²⁺標準液和950μL蒸餾水混合配制成2.5μmol/mL 標準溶液；再吸取25μL 2.5μmol/mL（2500nmol/mL）和975μL蒸餾水混合配制成62.5nmol/mL標準溶液備用。

產(chǎn)品說明：

雙子葉植物和非禾本科單子葉植物采用鐵螯合還原反應的高效活化和吸收機制從土壤中獲取鐵。三價鐵還原為二價鐵后才能被植物吸收利用。在鐵充足時，植物根部的三價鐵氧化還原酶將Fe(III)-螯合物中的鐵還原并將還原所得Fe²⁺轉運通過細胞質膜進入根細胞內。

高鐵螯合物還原酶（Ferric chelate reductase，FCR，EC1.16.1.7）催化Fe³⁺還原為Fe²⁺，F(xiàn)e²⁺和菲洛嗪形成紫色絡合物，在562nm下有特征吸收峰。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、分析天平、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、濃硫酸（95%-99% AR）、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請見“產(chǎn)品資料"文件

注意事項：

1、 如果?A小于0.010或測定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量或者延長反應時間后再進行測定；如果?A大于1或者A1大于1，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。

實驗實例：

1、 稱取0.1214g櫻桃番茄，加入提取液進行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA= A2-A1=0.921-0.082=0.839，ΔA標準=A標準-A空白=0.723-0.044=0.679，帶入公式計算：

FCR活性(U/g 質量) =2.083×ΔA÷ΔA標準÷W=21.020 U/g 質量

2、 稱取0.1002g閩南葉片，加入提取液進行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA= A2-A1=0.203-0.088=0.115，ΔA標準=A標準-A空白=0.723-0.044=0.679，帶入公式計算：

FCR活性(U/g 質量) =2.083×ΔA÷ΔA標準÷W=3.521U/g 質量

參考文獻：

[1] Shabnam N , Kim M , Kim H .Iron (Ⅲ) oxide nanoparticles alleviate arsenic induced stunting in Vigna radiata[J].Ecotoxicology and Environmental Safety, 2019, 183(Nov.).

[2 Kabir A H , Akther M S , Skalicky M ,et al.Downregulation of Zn-transporters along with Fe and redox imbalance causes growth and photosynthetic disturbance in Zn-deficient tomato[J].Scientific Reports, 2021, 11(1).

[3] Ojeda M , Schaffer B , Davies F S .Root and Leaf Ferric Chelate Reductase Activity in Pond Apple and

Soursop[J].Journal of Plant Nutrition, 2005, 27(8):1381-1393.

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